综述：从基因编辑到肿瘤根除：CRISPR在癌症治疗中的革命

（编辑推荐）本综述系统阐述了CRISPR-Cas9技术在癌症免疫治疗中的突破性应用，涵盖基因敲除（KO）/敲入（KI）、CAR-T/TCR-T细胞优化、肿瘤微环境（TME）调控等核心领域，同时探讨了脱靶效应、递送系统等挑战，为肿瘤靶向治疗提供前沿视角。

　　

CRISPR-Cas9技术引领癌症治疗新纪元

Abstract
癌症作为全球健康重大挑战，现有疗法常面临疗效不足的困境。CRISPR-Cas9基因编辑技术的出现为肿瘤免疫治疗带来革命性突破，其通过精准调控基因表达、优化细胞疗法及发现新靶点，显著提升治疗潜力。

Introduction
传统癌症疗法（手术/放疗/化疗）存在毒性大、特异性差等缺陷。免疫检查点抑制剂、CAR-T细胞疗法等虽取得进展，但仍受限于免疫抑制性微环境和细胞因子风暴。CRISPR-Cas9凭借sgRNA设计灵活性和高效编辑能力，成为超越TALENs/ZFNs的基因编辑利器。

CRISPR-Cas9技术原理
源自细菌免疫防御系统的CRISPR-Cas9通过crRNA引导Cas9核酸酶靶向切割DNA，诱发双链断裂（DSBs）。细胞通过非同源末端连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）机制完成编辑，实现基因敲除或精确插入。

多功能CRISPR工具箱
• CRISPRa/i：利用失活Cas9（dCas9）调控基因转录
• Cas12/Cas13：可检测循环肿瘤DNA（ctDNA）等生物标志物
• 全基因组筛查：发现肿瘤耐药/转移相关基因

细胞疗法优化
CAR-T细胞增强：通过敲除PD-1等免疫检查点基因，或插入抗凋亡基因BCL2，显著提升CAR-T细胞在实体瘤中的持久性。临床前研究显示，CRISPR编辑的CD19 CAR-T细胞对B细胞恶性肿瘤疗效提升40%。

TCR-T细胞改造：将NY-ESO-1特异性TCR基因精准插入TRAC位点，避免内源性TCR错配导致的移植物抗宿主病（GVHD）。

NK细胞工程化：编辑NKG2D受体增强对MHC-I缺失肿瘤的识别，联合CRISPR敲除抑制性受体CD96，细胞毒性提升3倍。

空间基因组学突破
CRISPR-GO技术结合单细胞测序，首次实现肿瘤微环境内基因编辑效应的三维追踪。Perturb-ma平台通过多重成像揭示肺癌中KRAS突变与微环境重塑的时空关联。

临床转化挑战
• 脱靶风险：全基因组测序发现非目标位点INDELs发生率约0.1%
• 递送瓶颈：纳米颗粒包裹的RNP复合物在实体瘤穿透效率不足15%
• 免疫原性：抗Cas9抗体可能中和治疗效果

Conclusion
尽管存在技术瓶颈，CRISPR-Cas9已推动癌症治疗进入精准编辑时代。未来需开发高保真Cas变体（如HiFi-Cas9）和新型递送系统，最终实现从血液肿瘤到实体瘤的全面突破。