抑制RIPK4通过维生素D信号通路增强黑色素瘤生长抑制的研究

本研究针对黑色素瘤治疗中维生素D信号通路调控不足的问题，通过CRISPR/Cas9和siRNA技术靶向抑制RIPK4，发现其可显著提升VDR表达并增强1,25-D3 对NF-κB和Wnt/β-catenin通路的抑制作用，为联合靶向治疗提供新策略。

　　

黑色素瘤作为最具侵袭性的皮肤恶性肿瘤，其治疗始终面临巨大挑战。尽管近年来靶向治疗和免疫治疗取得进展，但耐药性和复发问题依然突出。有趣的是，维生素D₃
的活性形式1,25-二羟基维生素D₃
(1,25-D₃
)被发现具有抑制肿瘤生长的潜力，但其作用机制和增效策略仍需深入探索。与此同时，受体相互作用蛋白激酶4(RIPK4)在多种癌症中被证实参与调控关键信号通路，但其在黑色素瘤中与维生素D信号通路的交互作用尚未阐明。

针对这一科学问题，雅盖隆大学的研究团队在《Molecular and Cellular Endocrinology》发表了创新性研究成果。研究人员通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建RIPK4稳定敲除的黑色素瘤细胞系，结合siRNA瞬时沉默、Western blot、qRT-PCR等技术，系统研究了RIPK4对维生素D信号通路的影响。3D细胞培养模型和划痕实验等功能性分析进一步验证了研究假设。

研究结果部分，2.1小节发现RIPK4下调显著增加VDR蛋白表达，Pearson相关系数达0.92。2.2小节通过MTT实验和Ki67染色证实，RIPK4敲除使细胞对1,25-D₃
的敏感性提升33%-45%。2.3小节首次报道1,25-D₃
可通过VDRE元件上调RIPK4转录，形成反馈调节。2.4小节揭示RIPK4敲除降低CYP24A1表达，延长1,25-D₃
作用时间。2.5小节阐明NF-κB通路中p-p65和IκBα的调控机制。2.6小节在3D模型中验证联合策略可使肿瘤球体缩小56%。

在讨论部分，作者创新性提出"RIPK4-VDR-NF-κB"调控轴的概念。与既往研究相比，该工作首次发现：1)RIPK4与VDR存在蛋白表达正相关；2)RIPK4缺失可抑制维生素D代谢酶CYP24A1；3)双重靶向策略在3D模型中效果显著。这些发现为临床转化提供重要依据：一方面，检测RIPK4表达可能成为预测维生素D治疗效果的生物标志物；另一方面，开发RIPK4小分子抑制剂或与维生素D类似物联用，有望成为新的辅助治疗方案。

技术方法方面，研究主要采用：1)CRISPR/Cas9构建RIPK4稳定敲除细胞系；2)siRNA瞬时基因沉默；3)Western blot和qRT-PCR检测蛋白及mRNA表达；4)MTT法和Ki67染色评估细胞增殖；5)划痕实验分析迁移能力；6)3D肿瘤球体培养模型。

这项研究的临床意义在于：首先，为BRAF抑制剂耐药患者提供潜在替代方案；其次，发现CYP24A1调控新机制，为延长维生素D治疗效果提供思路；最后，建立的RIPK4-VDR调控网络为精准医疗提供新靶点。未来研究需在PDX模型和临床试验中进一步验证这一联合策略的有效性。