基于CRISPR-Cas13a的SHERLOCK超灵敏检测技术：传染性法氏囊病病毒诊断新突破

【编辑推荐】针对传染性法氏囊病病毒(IBDV)传统检测方法灵敏度不足的问题，研究人员开发了基于CRISPR-Cas13a的IBD-SHERLOCK检测技术。该技术整合RT-RPA等温预扩增与LwaCas13a侧向流动检测，灵敏度达5 aM（相当于3个RNA分子），在70份临床样本中检出15例RT-qPCR阴性病例，为禽类养殖场提供了高灵敏度的现场诊断工具。

　　

传染性法氏囊病(IBD)是严重危害雏鸡健康的烈性传染病，由双链RNA病毒IBDV引起，可导致家禽业重大经济损失。当前诊断面临两大困境：传统血清学方法如ELISA操作繁琐耗时，而RT-qPCR虽灵敏却依赖精密仪器。如何实现无需复杂设备的超灵敏现场检测，成为全球禽病防控的迫切需求。

来自爱资哈尔大学的研究团队创新性地将CRISPR-Cas13a系统应用于IBDV检测，开发出IBD-SHERLOCK检测技术。该研究通过优化RT-RPA等温扩增与Cas13a的RNA切割活性，结合侧向流动试纸条(LFD)可视化读值，建立了灵敏度较RT-qPCR提升百倍的现场诊断方案，相关成果发表于《Journal of Virological Methods》。

关键技术包括：1) 针对IBDV-VP2基因设计RT-RPA引物进行等温预扩增；2) 利用T7 RNA polymerase转录扩增产物；3) LwaCas13a-crRNA复合物特异性识别靶RNA并触发侧向流动检测；4) 使用埃及地区70份临床样本验证性能。

【IBDV参考毒株与其他禽病毒】
采用埃及动物健康研究所提供的经典血清型IBDV毒株(OQ999388)作为参考标准，通过对比H9N2禽流感病毒等验证检测特异性。

【IBD-SHERLOCK检测开发】
实验证实该技术可稳定检出5 aM浓度靶RNA（约3个病毒分子），在临床样本中成功识别出15例RT-qPCR阴性感染病例，显示其卓越的灵敏度优势。

【讨论】
该研究突破性在于：首次将SHERLOCK技术应用于禽类RNA病毒诊断，其LFD读值设计完美适配养殖场环境。相比需要热循环仪的RT-qPCR，该方案仅需恒温水浴即可完成检测，且耗时缩短50%。

【结论】
Ramadan Nancy K.团队开发的IBD-SHERLOCK技术实现了三大创新：1) 创纪录的5 aM检测限；2) 30分钟内完成样本到结果的转化；3) 无需专业设备的可视化判读。这项研究为禽类病毒现场诊断树立了新标准，其技术路线可拓展应用于其他动物RNA病毒的快速检测。