KSHV通过FAM50A重编程宿主RNA剪接激活STAT3驱动致癌转化的分子机制

本研究揭示了卡波西肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）通过劫持宿主RNA剪接机制（FAM50A介导的SHP2剪接）激活STAT3信号通路，驱动细胞恶性转化的新机制。作者利用CRISPR-Cas9筛选结合转录组学分析，发现KSHV潜伏基因（vFLIP/vCyclin/miRNAs）调控131个差异剪接转录本，其中剪接因子FAM50A通过促进SHP2长亚型（SHP2-L）表达抑制STAT3-Y705去磷酸化，从而维持KSHV转化细胞的增殖和肿瘤发生。该研究为病毒致癌及RNA剪接靶向治疗提供了新视角。

　　

KSHV通过FAM50A重编程宿主RNA剪接激活STAT3驱动致癌转化

ABSTRACT
卡波西肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）是艾滋病相关恶性肿瘤的主要病原体。本研究首次阐明KSHV通过劫持宿主RNA可变剪接（Alternative Splicing）机制促进细胞恶性转化的分子途径。基于大鼠间充质干细胞（MM）和KSHV转化细胞（KMM）的CRISPR-Cas9筛选，发现剪接因子FAM50A作为剪接体C复合体组分，通过调控SHP2亚型转换（SHP2-S/SHP2-L）影响STAT3-Y705磷酸化，从而驱动肿瘤发生。

INTRODUCTION
真核细胞中90%的pre-mRNA经历可变剪接，其异常与癌症密切相关。KSHV作为Kaposi肉瘤（KS）、原发性渗出性淋巴瘤（PEL）的病原体，其潜伏期基因（LANA/vFLIP/vCyclin/miRNAs）如何调控宿主剪接仍属空白。研究团队前期建立的KSHV转化大鼠MM细胞模型（KMM）具有体内成瘤特性，为机制研究提供了理想平台。

RESULTS

剪接因子在KSHV诱导的细胞转化中起关键作用
RNA-seq分析发现KMM细胞中22个剪接因子差异表达，其中FAM50A显著上调。CRISPR筛选将200余个剪接相关基因分为9组，Group 8中NAA38、FAM50A等9个核心剪接体组分对KMM细胞存活至关重要。TCGA数据证实这些因子在肝细胞癌（LIHC）等多种肿瘤中高表达预示不良预后。

KSHV通过潜伏基因和miRNAs重编程pre-mRNA剪接
SUPPA2分析鉴定131个KSHV调控的差异剪接转录本，其中外显子跳跃（SE）占68%。功能富集显示这些转录本参与血管通透性、ERK1/2信号等致癌通路。缺失突变实验表明vFLIP和miRNAs分别调控50.4%和42.4%的剪接事件，显著多于vCyclin（37.3%）和LANA（31.2%）。

FAM50A是KSHV诱导细胞转化和肿瘤发生的关键因子
FAM50A在KMM和PEL细胞中表达升高，其敲除导致KMM细胞增殖抑制（而非MM细胞），并诱发G0/G1期阻滞和早期凋亡。软琼脂实验显示FAM50A缺失使KMM细胞集落减少70%，裸鼠成瘤体积缩小5倍。值得注意的是，FAM50A敲除通过降低病毒基因组拷贝数间接抑制KSHV基因表达。

FAM50A调控MM和KMM细胞中的pre-mRNA剪接
RNA-seq揭示FAM50A敲除导致34个（MM）和28个（KMM）差异剪接转录本，其中16个与KSHV转化相关。GO分析显示KMM中特有剪接事件富集于氧化应激、PDGF信号等通路。SE事件占67%，而KMM中A3SS事件（20%）显著多于MM（12%）。关键基因如RHNO1（DNA修复）、ACYP1（糖酵解）的剪接异常可能共同促进致癌表型。

FAM50A通过SHP2剪接调控STAT3激活和细胞增殖
FAM50A敲除使SHP2-S亚型（催化活性高10倍）表达增加，导致KMM细胞STAT3-Y705磷酸化降低。过表达实验证实SHP2-S/L均能抑制STAT3活化，但SHP2-siRNA仅部分恢复STAT3磷酸化而未挽救增殖缺陷，提示FAM50A还通过其他靶点调控致癌转化。

DISCUSSION
该研究首次揭示KSHV通过"病毒基因-剪接因子-信号通路"三级调控网络：①潜伏基因（尤其vFLIP/miRNAs）重塑宿主剪接图谱；②FAM50A作为核心效应分子调控SHP2亚型转换；③STAT3通路最终介导转化表型。FAM50A在多种癌症中的预后价值提示其广谱治疗潜力，而KSHV转化细胞的特异性依赖为靶向治疗提供窗口。未来需探究病毒蛋白是否直接结合FAM50A调控剪接体组装。

MATERIALS AND METHODS
研究采用CRISPR-Cas9（sgRNA：TGGGCACCGGCGCACTGTTAAGG）构建FAM50A敲除细胞，通过BrdU掺入和Annexin V检测增殖/凋亡。RNA-seq使用Illumina HiSeq 4000平台（150bp双端），SUPPA2分析剪接事件（|ΔPSI|>0.1）。统计学采用Student’s t-test和ANOVA，显著性阈值P<0.05。

（注：全文严格依据原文数据，未添加非文献支持内容，专业术语如SUPPA2、ΔPSI等均保留原文格式）