人源化TRPM4通道阻断抗体的开发及其在缺血性脑病治疗中的潜在应用

本研究针对TRPM4通道在神经系统疾病中的关键作用，开发了人源化抗体M4H，通过CDR移植技术保留抗原结合特性，证实其可有效抑制ATP耗竭诱导的TRPM4电流和内皮细胞肿胀，为缺血性脑卒中血管损伤治疗提供新型靶向策略。

　　

瞬态受体电位melastatin 4（TRPM4）通道作为单价阳离子通道，在多种神经系统疾病中扮演关键角色。现有TRPM4阻断剂如9-吩anthrol和格列本脲存在特异性不足或靶向相互作用亚基的问题，且可能伴随致癌性和代谢紊乱风险。新加坡国立神经科学研究所等机构的研究团队通过CDR移植技术将小鼠单抗M4M人源化，获得IgG1型抗体Ab1-6，其中Ab6（命名为M4H）展现出对ATP耗竭条件下人脑微血管内皮细胞TRPM4电流的显著抑制，并能缓解细胞肿胀现象。该成果发表于《Scientific Reports》，为开发神经系统血管损伤的精准疗法奠定基础。

研究采用表面等离子共振（SPR）分析抗体亲和力，通过动态光散射（DLS）和毛细管电泳评估稳定性，结合全细胞膜片钳技术验证功能抑制效果。免疫荧光染色证实人源化抗体可特异性结合活细胞表面TRPM4通道，SEC-HPLC分析显示Ab6在40℃和pH3.5条件下保持稳定。

结果部分显示：1）抗体人源化部分通过Western blot证实Ab1-7仅结合人源TRPM4；电生理实验表明20μg/ml剂量可完全抑制ATP耗竭诱导的电流增强。2）亲和力排名显示Ab2/4/6的KD值在3.16-4.02 nM范围，SPR传感器图谱揭示抗原结合动力学特征。3）稳定性测试中Ab6在62℃以下无聚集，40℃保存28天仍保持97.76%纯度。4）功能验证发现Ab6（M4H）对HBMVECs的IC₅₀
为1.04±1.3μg/ml，显著降低膜电容变化（p<0.0001）。

结论指出，人源化TRPM4抗体通过双重机制（直接阻断通道和促进内化）发挥作用，其种属特异性由EPGF表位决定。相较于siRNA疗法，抗体在急性期干预中更具优势。讨论部分强调，虽然人源化导致亲和力轻微下降（kd从1.50E-03增至1.95E-03），但功能活性未受影响。未来需在携带人TRPM4序列的转基因大鼠模型中验证其免疫原性，这对拓展卒中再灌注治疗时间窗具有重要临床意义。