高通量单分子荧光测序联用技术(MUSCLE)：文库规模动态表征新策略

来自国际顶尖团队的研究人员开发出名为MUSCLE（多重单分子文库规模表征）的创新技术，通过整合单分子荧光显微术与Illumina测序平台，成功实现对数百万分子动态行为的高通量解析。该技术突破传统单分子方法通量限制，在Cas9介导的DNA解旋/重旋动力学研究中展现卓越性能，为蛋白质-核酸互作研究提供全新工具。其创新的连接酶表面固定策略使簇形成效率突破40%，配合3D打印流动池适配器，可在3-4天内完成从样本制备到多维数据整合的全流程分析。

　　

这项名为多重单分子文库规模表征(Multiplexed single-molecule characterization at the library scale, MUSCLE)的技术，巧妙地将单分子荧光显微镜与新一代测序(Next-generation sequencing, NGS)平台联姻。传统单分子方法虽能解析生物大分子的精妙舞蹈，却受限于样本通量和成本。MUSCLE技术横空出世，通过独特的连接酶介导表面固定策略，使分子簇形成效率飙升至>40%，配合革命性的3D打印流动池适配器，实现显微观测过程中的液体实时置换。

在Cas9核酸酶与靶DNA相互作用的研究中，该技术成功捕捉到序列依赖性的DNA解旋(unwinding)与重旋(rewinding)动力学特征，突破传统核酸模型系统的局限。从文库设计到数据采集的完整流程仅需3-4天：先通过Illumina测序平台获取海量序列信息，再经空间配准技术将荧光动力学数据与测序结果精准对应。这种多维数据整合策略，为探索蛋白质-核酸相互作用的序列-功能关系开辟了新维度，有望在基因编辑优化、药物靶点筛选等领域产生深远影响。