高效毛状根系统在棉花CRISPR/Cas系统活性验证中的应用

为解决传统棉花毛状根诱导方法（无菌组织培养和非无菌茎尖注射）耗时费力的问题，研究人员开发了一种高效的非无菌条件下棉花下胚轴感染农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）的毛状根诱导技术。该方法通过斜切保留1 cm下胚轴顶端，接种后8天内诱导率超90%，并验证了eGFP和GUS报告基因（转化效率40.9–68.18%）及CRISPR/Cas系统的靶点编辑效率，为棉花基因编辑靶点筛选提供了关键技术支撑。

　　

毛状根诱导系统因其快速高效的特点，被广泛用于植物基因表达与功能研究，同时也是评估CRISPR/Cas系统活性的利器。传统棉花毛状根诱导依赖无菌组织培养或非无菌茎尖注射，但两者均存在操作繁琐、周期长的缺陷。本研究另辟蹊径，在非无菌条件下通过农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)侵染棉花下胚轴，建立了一套高效诱导流程：将子叶展开的棉苗斜切去顶，保留1 cm下胚轴顶端接种农杆菌，8天后三个品种的毛状根诱导率均突破90%。

为验证该方法可靠性，研究人员过表达了两种明星报告基因——绿色荧光蛋白(eGFP)和β-葡萄糖醛酸苷酶(GUS)，测得转化效率分别达40.9–68.18%和50–68.18%。更令人振奋的是，该体系成功应用于不同CRISPR/Cas系统的靶位点编辑效率测试，犹如为棉花基因编辑的靶点筛选装配了一把精准的"分子尺"。这项技术突破不仅大幅提升了实验效率，更为棉花功能基因组学研究提供了新的技术路径。