慢性淋巴细胞白血病中USP28缺失通过调控NOTCH1信号通路揭示新型治疗靶点

本研究针对慢性淋巴细胞白血病(CLL)中NOTCH1信号异常激活的机制展开深入探索。研究人员发现位于11q23缺失区域的去泛素化酶USP28可通过与NOTCH1细胞内结构域(NICD)相互作用稳定NOTCH1信号，在del(11q)患者中USP28缺失导致NOTCH1信号紊乱。通过CRISPR/Cas9基因编辑、RNA-Seq等技术证实USP28抑制剂AZ1能有效抑制NOTCH1活性，并与BCL-2抑制剂venetoclax联用显著增强抗肿瘤效果。该研究为CLL患者特别是NOTCH1信号激活亚群提供了新的治疗策略。

　　

慢性淋巴细胞白血病(CLL)作为最常见的B细胞恶性肿瘤，其临床异质性和治疗耐药问题一直困扰着医学界。尽管BCR信号通路抑制剂和BCL-2抑制剂等靶向药物显著改善了患者预后，但NOTCH1信号通路的异常激活仍是导致疾病进展和治疗失败的重要因素。约50%的CLL患者存在NOTCH1信号激活，其中仅部分病例可由NOTCH1或FBXW7突变解释，其余患者的激活机制仍不明确。这一科学难题引起了德国乌尔姆大学、西班牙萨拉曼卡大学等机构研究团队的关注，他们在《Leukemia》发表的重要研究揭示了USP28缺失通过调控NOTCH1信号通路在CLL发病中的关键作用。

研究团队采用了多学科交叉的研究方法：通过分析96例del(11q)患者的SNP芯片数据和CLL8临床试验队列的基因表达谱；建立CRISPR/Cas9基因编辑的HG3细胞模型；运用RNA-Seq和ChIP-Seq技术分析基因表达和RBPJ结合位点；采用免疫共沉淀验证蛋白相互作用；使用USP28特异性抑制剂AZ1处理原代CLL细胞进行功能验证。

研究结果部分，"USP28 is deleted in del(11q) patients resulting in decreased NOTCH1 signaling"表明，在90%的del(11q)患者中USP28发生单等位基因缺失，导致mRNA和蛋白表达水平显著降低。通过比较18例del(11q)和18例非del(11q)患者样本，发现USP28缺失与NOTCH1细胞内结构域(NICD)水平降低显著相关。

"USP28 interacts with NICD and affects NOTCH1 stability and activity"部分揭示，USP28通过不依赖FBXW7的方式与NICD相互作用。免疫共沉淀实验证明，即使PEST结构域几乎完全缺失的NICD变异体仍能与USP28结合。在HEK293细胞中过表达USP28可延长NICD半衰期，而USP28杂合缺失的HG3细胞则显示NOTCH1活性显著降低。

"USP28 affects NOTCH1 target genes in CLL patients and cell lines"部分整合多组学数据，鉴定出15个受USP28和NOTCH1共同调控的靶基因，包括IRF8、SOX5、KANK1等在免疫调节和肿瘤发生中起关键作用的基因。这些基因在del(11q)患者中呈现特异性表达紊乱模式。

"USP28 inhibition is a therapeutic option for CLL"部分展示了转化医学价值。USP28抑制剂AZ1处理可降低原代CLL细胞中NICD和c-MYC蛋白水平，显著抑制NOTCH1信号活性。特别值得注意的是，AZ1与venetoclax联用在NOTCH1突变或高NICD表达的CLL细胞中显示出协同效应，为临床联合用药提供了实验依据。

这项研究的重要发现在于阐明了CLL中NOTCH1信号调控的新机制：USP28作为位于11q23区域的NOTCH1正向调控因子，其缺失导致del(11q)CLL患者NOTCH1信号紊乱。研究不仅解决了长期以来关于非突变型NOTCH1激活机制的疑问，还提出了靶向USP28的治疗新策略。USP28抑制剂AZ1单独或与venetoclax联用，特别适用于NOTCH1信号激活的CLL患者群体，这部分患者通常对常规治疗效果不佳。该研究为CLL的精准治疗开辟了新途径，具有重要的临床转化价值。