基于在线HPLC-FLU联用技术开发新型5α还原酶2型抑制剂的高效筛选与药理学评价

推荐 本研究针对雄激素代谢相关疾病中5α还原酶2型（5-AR2）异常表达导致的病理问题，开发了一种在线HPLC-FLU联用系统，首次实现了从天然产物中快速识别5-AR2抑制剂的功能。通过对Picea wilsonii的活性成分筛选，成功分离出三种高纯度抑制剂（pungenin、astringe、isorhapontin），并通过分子对接和酶活性实验证实其显著抑制作用。该研究为开发治疗雄激素相关疾病的天然药物提供了新靶点，并验证了在线联用系统的高效性与可靠性。

　　

论文解读
雄激素代谢紊乱引发的疾病，如痤疮、雄激素性脱发和良性前列腺增生，严重威胁人类健康。这类疾病的核心病理机制与5α还原酶（5-AR）异常激活密切相关，尤其是5α还原酶2型（5-AR2）在睾酮向二氢睾酮（DHT）的转化中起关键作用。DHT的过度积累会导致毛囊微环境失衡、前列腺组织增生等病理性改变。尽管临床药物如非那雄胺和度他雄胺已投入使用，但其心血管副作用和性功能障碍风险限制了应用范围。因此，从天然产物中开发高效低毒的5-AR2抑制剂成为研究热点。

中国药科大学的研究团队针对这一挑战，构建了首个在线HPLC-5AR联用系统，实现了5-AR2抑制剂的快速识别与分离。该系统整合高效液相色谱（HPLC）与荧光检测模块，通过实时监测荧光信号变化筛选活性成分。研究以Picea wilsonii为对象，从中分离出三种高纯度化合物：pungenin、astringe和isorhapontin。分子对接分析显示，这些化合物与5-AR2的结合能分别为-7.72 kcal/mol、-9.36 kcal/mol和-9.11 kcal/mol，其中astringe因兼具强结合能力和双重调控机制（抑制酶活性并下调蛋白及转录水平）表现出最优药效。体外实验证实，astringe的半数抑制浓度（IC₅₀）达12.6 μM，显著优于其他两种化合物。

研究方法上，团队采用在线HPLC-5AR系统进行活性筛选，结合中高压液相色谱分离纯化，并通过分子对接模拟与酶活性测定验证化合物功能。样本来源于青藏高原人工栽培的Picea wilsonii，经甲醇提取和多级色谱分离后获得目标化合物。

研究结果表明，在线HPLC-5AR系统不仅提高了筛选效率，还通过荧光信号变化直观反映活性成分的作用效果。pungenin、astringe和isorhapontin均显著抑制5-AR2活性，并在细胞模型中减少DHT生成。其中，astringe通过结合5-AR2活性位点关键残基（如Glu57、Arg94），同时下调蛋白表达量，实现了对雄激素代谢通路的精准干预。这一发现为开发新型治疗药物提供了理论依据，并验证了在线联用系统在天然产物筛选中的实用价值。

该研究突破了传统筛选方法的局限性，为天然产物化学研究开辟了新路径。在线HPLC-5AR系统的建立，不仅加速了活性成分的发现进程，还为其他疾病相关靶点的筛选提供了可复制的范式。未来研究可进一步优化系统参数，并探索更多天然资源库的应用潜力。