细胞外囊泡胶质纤维酸性蛋白作为创伤性脑损伤严重程度的循环生物标志物研究

本研究针对创伤性脑损伤（TBI）诊断与预后生物标志物不足的问题，通过分析细胞外囊泡（EV）中胶质纤维酸性蛋白（EV-GFAP）等神经源性蛋白的表达水平，发现EV-GFAP在TBI患者中显著升高且与影像学严重程度相关，为TBI早期诊断提供了新思路。研究采用尺寸排阻色谱（SEC）和单分子阵列（Simoa）技术，验证了EV-GFAP的临床潜力，同时指出血浆GFAP仍是更实用的替代指标。

　　

创伤性脑损伤（TBI）是全球重大健康挑战，每年影响约6900万人，但其诊断和预后评估仍缺乏高效生物标志物。尽管胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、神经丝轻链（NfL）等血浆蛋白已被研究，但细胞外囊泡（EV）因其能穿越血脑屏障且稳定性高，可能更精准反映神经损伤。然而，现有EV研究存在方法学局限，如沉淀法导致的污染问题，且样本量普遍较小。为此，丹麦奥胡斯大学医院等机构的研究团队在《Journal of Molecular Neuroscience》发表论文，系统评估了EV包裹的神经蛋白（EV-GFAP、EV-NfL等）在TBI中的诊断价值。

研究采用尺寸排阻色谱（SEC）分离血浆EV，结合纳米颗粒追踪分析（NTA）和高分辨率流式细胞术（hFCM）验证EV纯度，并通过单分子阵列（Simoa）检测蛋白水平。队列包含93例创伤患者（75例TBI，18例非TBI），在入院时、伤后15小时和72小时采集样本，分析EV与血浆中GFAP等蛋白的动态变化。

方法验证
SEC分离的EV粒径集中在70-130 nm，hFCM检测到CD9⁺CD63⁺CD81⁺标志物，且去垢剂处理后信号消失，证实EV特异性。蛋白释放实验显示，Triton X-100处理显著增加EV内GFAP等蛋白浓度，而超声处理效果有限，提示EV包裹蛋白的稳定性。

EV-GFAP与TBI严重程度
EV-GFAP在TBI患者入院时和伤后15小时显著高于非TBI组（p=0.02和p=0.05），且与Marshall评分（OR=2.19）和阳性头CT结果（OR=3.10）相关，但与其他指标（如GCS评分）无关。EV-NfL、EV-T-Tau和EV-UCH-L1则无显著差异。

血浆与EV标志物比较
血浆GFAP同样与TBI严重程度相关，但其升高持续至72小时，而EV-GFAP仅早期显著。两者诊断效能相似（AUC=0.68），提示血浆检测更具临床实用性。

预后关联
EV或血浆标志物均未显示与1年死亡率或6-12个月功能结局（GOSE评分）的显著关联，可能因样本量不足或EV反映急性损伤而非长期预后。

讨论与意义
该研究首次通过严格方法学验证，证实EV-GFAP可作为TBI急性期生物标志物，但其增量价值未超越血浆GFAP。SEC技术的低蛋白污染特性为EV研究提供了可靠平台，但高变异系数（CV%达38%）提示需优化方法。未来需探索EV标志物在TBI病理机制中的独特作用，如亚型分析或动态监测。尽管EV检测尚难普及，本研究为TBI精准诊疗奠定了基础，尤其为早期干预提供了潜在靶点。