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为明确 Calb?神经元性别差异出现时间及 Calb1 在视前区性双态核（SDN）形成中的作用，研究人员对出生后小鼠 SDN 内 Calb?神经元数量、Calb1 mRNA 水平进行分析，并开展 Calb1 敲低实验。发现 PD15-20 雄性 Calb?神经元显著增加，Calb1 对 SDN 神经元聚集至关重要。
在大脑的奇妙世界里，性别的奥秘隐藏在细微的神经元结构之中。视前区性双态核（Sexually Dimorphic Nucleus, SDN）作为大脑性别差异的关键区域，其发育机制一直是神经科学领域的未解之谜。钙结合蛋白 D-28K（Calbindin D-28K, Calb）阳性神经元作为 SDN 的重要组成部分，在雄性和雌性小鼠中数量存在差异，但这种差异何时出现、Calb 在 SDN 形成中扮演何种角色，长期以来困扰着研究者。传统观点认为，性激素通过调控神经元凋亡、吞噬或迁移等过程影响 SDN 的性别分化，但具体到 Calb?神经元的动态变化及分子机制，仍缺乏系统性研究。为揭开这些谜团，日本埼玉大学（Saitama University）的研究团队开展了一系列实验，相关成果发表在《Cell and Tissue Research》杂志上，为理解大脑性别差异的形成提供了新视角。
研究人员主要采用了以下关键技术方法：通过免疫组织化学染色（Immunohistochemistry）标记 Calb?神经元，结合立体学分析（Stereological Analysis）定量检测出生后 5 天（PD5）至 20 天（PD20）小鼠 SDN 内 Calb?神经元数量及 SDN 体积变化；利用激光显微切割（Laser Microdissection, LMD）技术分离 SDN 组织，通过逆转录定量 PCR（RT-qPCR）检测 Calb1 mRNA 水平；采用腺相关病毒（AAV）载体介导的 Calb1 基因敲低（Knockdown, KD）技术，在新生小鼠视前区局部干扰 Calb1 表达，分析其对 SDN 神经元组成的影响。
研究结果
1. Calb?神经元性别差异在出生后 15-20 天出现
免疫组织化学结果显示，PD5 至 PD15 时，雌雄小鼠 SDN 内 Calb?神经元数量无显著差异，但 PD20 雄性小鼠 Calb?神经元数量较 PD10、PD15 雄性及同阶段雌性小鼠显著增加（P<0.0001），SDN 体积也呈现雄性特异性增大。这表明 Calb?神经元的性别差异在出生后晚期（PD15-20）才正式建立，早于青春期启动时间。
2. Calb1 mRNA 水平无性别差异但随发育动态变化
RT-qPCR 结果显示，SDN 内 Calb1 mRNA 水平在 PD0 至 PD5 较低，PD10 后显著升高（P<0.0001），但雌雄之间无显著差异。这提示 Calb?神经元数量的性别差异并非由 Calb1 转录水平的性别差异驱动，可能与神经元迁移或存活等转录后机制相关。
3. Calb1 敲低导致 SDN 神经元聚集减少
在新生小鼠视前区注射 AAV-shCalb 病毒后，PD20 雄性小鼠右侧 SDN 内 Calb?神经元数量较左侧及对照组显著减少（P<0.0001），总神经元数量（Calb?/Calb?神经元）也随之下降，但 Calb?神经元及胶质细胞数量不受影响。这表明 Calb1 不仅是 Calb?神经元的标志物，更是 SDN 神经元聚集和组织不可或缺的分子。
研究结论与讨论
本研究首次明确了小鼠 SDN 内 Calb?神经元性别差异出现于出生后 15-20 天，这一过程与雄性特异性的神经元迁移或整合增加有关，而非凋亡或转录差异。Calb1 通过调控细胞内 Ca2?信号，可能影响神经元迁移的动力学或存活能力，从而促进 SDN 的形态建成。值得注意的是，Calb?神经元中包含投射至腹侧被盖区的雄性特异性神经元群，其在性行为调控中具有关键作用，提示 Calb1 不仅参与结构分化，还可能通过神经环路影响性别相关行为。
该研究填补了 SDN 发育机制的关键空白，揭示了 Calb1 在神经元空间组织中的非经典功能，为理解大脑性别差异的细胞分子基础提供了新范式。未来研究可进一步探索 Calb1 调控神经元迁移的具体信号通路（如 Ca2?/ 钙调蛋白依赖的细胞骨架调控），以及性激素如何通过 Calb1 间接影响 SDN 发育。这些发现不仅深化了对正常脑发育的认知，也为性别相关神经疾病（如性分化异常、性行为障碍）的病理机制研究提供了潜在靶点。
