基于多靶点NGS技术的脑脊液循环肿瘤DNA检测在CNS淋巴瘤诊断中的真实世界研究

为解决原发性及继发性中枢神经系统淋巴瘤(CNSL)诊断难题，捷克研究团队通过前瞻性真实世界研究，评估了基于LYNX panel的多靶点NGS技术检测脑脊液(CSF)循环肿瘤DNA(ctDNA)的临床价值。研究发现该技术对CNS浸润的检出率高达90%，显著优于流式细胞术(21%)和单靶点MYD88检测(46%)，证实了CSF作为生物样本的优越性。这项发表于《Biomarker Research》的研究为CNSL无创诊断提供了可靠方案，推动液体活检技术向临床实践转化。

　　

在神经肿瘤领域，原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)和系统性淋巴瘤继发中枢侵犯(SCNSL)始终是临床诊断的"灰色地带"。传统诊断手段如同在迷雾中摸索：组织活检受限于手术风险和解剖位置，MRI难以区分炎症与肿瘤，而脑脊液细胞学检查的灵敏度不足21%。更棘手的是，约30%疑似病例因样本量不足导致诊断延迟，患者往往在等待确诊过程中错过最佳治疗时机。这种诊断困境直接影响了患者预后——PCNSL中位生存期仅3-4年，而SCNSL复发后生存期更短至2-3个月。正是这些临床痛点，促使捷克布尔诺大学医院的研究团队探索更精准的无创诊断方法。

布尔诺大学医院血液肿瘤科的Veronika Navrkalova团队在《Biomarker Research》发表了一项突破性研究。他们创新性地采用LYNX panel——一种能同步分析基因变异、染色体畸变和抗原受体重排的多靶点NGS技术，对164份来自56例CNSL患者的血浆、脑脊液和组织样本进行检测。这项研究首次在真实世界场景中系统比较了不同生物样本和检测策略的效能，为临床实践提供了明确的技术路线图。

研究采用三项关键技术：首先，使用STRECK专用管采集并稳定脑脊液和血浆中的cfDNA；其次，采用覆盖1.13Mb靶区的LYNX panel进行多维度基因组分析，检测灵敏度达5%（变异）和15-20%（染色体异常）；第三，对cfDNA不足样本采用数字PCR(dPCR)检测MYD88 L265P热点突变。所有患者均接受标准MRI和流式细胞术(FC)检测作为对照，其中28例在采样前接受过地塞米松治疗，这为评估激素对检测的影响提供了独特视角。

在样本特征方面，研究发现脑脊液cfDNA中位含量仅为109ng，显著低于血浆的571ng，但ctDNA检出率呈现戏剧性反差。通过"Multi-target NGS profiling reveals CSF superiority"部分的数据显示，CSF-ctDNA在PCNSL初诊患者中检出率达79%(15/19)，而血浆仅5%(1/22)；在SCNSL基线样本中，CSF和血浆检出率分别为73%(8/11)和82%(14/17)。特别值得注意的是，在标准方法阴性的17例疑似病例中，多靶点NGS发现了7例CSF-ctDNA阳性患者，这提示该方法能识别亚临床浸润。

"Comparative analysis with flow cytometry"部分的发现更具颠覆性。传统流式细胞术仅检出21%(13/61)的阳性样本，而CSF-ctDNA检测将阳性率提升至91%(29/32)，两者差异具有统计学意义(p<0.001)。在48例流式阴性/不确定样本中，NGS发现了22例ctDNA阳性和7例gDNA阳性病例。即使排除cfDNA不足的样本，在32例同步检测样本中，NGS的灵敏度仍保持91%对25%的绝对优势。

基因组图谱分析("Genomic landscape characterization")揭示了CNSL的分子特征：50%患者携带MYD88突变，36%存在PIM1和KMT2D突变，79%呈现复杂核型（≥5个染色体异常）。PCNSL显著富集MYD88 L265P突变(67% vs 21%，p=0.008)和VH4-34基因片段使用(8/25 vs 3/31)，而SCNSL更多见BCL2/MYC易位(p=0.024)。这些发现不仅印证了CNSL属于DLBCL的MCD亚型，更揭示了免疫特权部位的独特生物学特征。

在"Clinical implementation insights"部分，研究提出了四点转化医学建议：将CSF采集量增至20ml以提高检出率；优先选择CSF而非血浆进行常规检测；建议采用超灵敏方法进行纵向监测；需要多中心研究验证预后价值。作者特别强调，虽然血浆ctDNA在预测CNS复发风险方面有潜力（携带MCD表型/TP53突变等特征的患者38%出现CNS侵犯），但CSF仍是确诊的金标准生物样本。

这项研究的核心价值在于打通了实验室发现与临床应用的"最后一公里"。通过验证常规NGS方法的可行性，研究者证明无需超灵敏技术即可实现90%的CSL浸润检出率，这使液体活检在资源有限的医疗机构也能推广。多靶点策略将检出率较单靶点MYD88检测提升近一倍，这种"广撒网"策略有效克服了肿瘤异质性难题。更重要的是，研究建立了CSF处理的标准流程——同步分析上清液cfDNA和沉淀gDNA可使诊断效能最大化，这种双管齐下的方法为临床决策提供了双重保障。

正如讨论部分指出，该研究仍存在样本量有限、随访时间短等局限，但已为CNSL诊疗范式转变奠定了基础。未来，整合基因组特征与CNS-IPI评分可能实现更精准的风险分层，而基于ctDNA的分子残留病灶监测或将改写治疗应答评估标准。这项来自真实世界的研究证明，当技术创新与临床需求精准对接时，即使是最具挑战性的神经系统肿瘤，也能迎来诊断精度的飞跃。