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本文介绍了一种新型癌症疫苗，通过细胞内凝胶化肿瘤细胞，并结合 CD47 阻断和损伤相关分子模式（DAMP）暴露技术制备而成。该疫苗能有效预防和治疗肿瘤，提高免疫原性，为个性化肿瘤细胞疫苗开发提供了新方向，极具研究价值。
引言
疫苗是肿瘤治疗的理想策略，全肿瘤细胞疫苗因包含多种肿瘤相关抗原而备受关注，但传统制备方法存在免疫原性不足、肿瘤抗原易降解等问题。本研究旨在通过细胞内凝胶化技术结合 CD47 阻断和 DAMP 暴露，制备一种新型癌症疫苗，以解决这些难题。
结果
- 细胞内凝胶化肿瘤细胞作为全细胞肿瘤疫苗：选用低分子量的聚乙二醇二丙烯酸酯（PEG - DA，700 Da）和光引发剂（Irgacure 2959，I2959），在冻融循环下将其导入肿瘤细胞，经紫外线照射引发自由基聚合和交联，实现细胞内凝胶化，制备出细胞内凝胶化黑色素瘤细胞（GMC）。GMC 保持了肿瘤细胞的形态、抗原完整性和生理稳定性，且无细胞活力，为全细胞疫苗开发提供了良好平台。
- GMC 与 DAMP 过表达增强 DC 激活：用低浓度阿霉素（DOX）预处理活的黑色素瘤细胞（MC），诱导免疫原性细胞死亡（ICD）和 DAMP 暴露，再进行细胞内凝胶化，得到 DOX - GMC。DOX - GMC 表面的钙网蛋白（CRT）过表达，促进了树突状细胞（DC）的识别和吞噬，增强了 DC 的成熟和抗原呈递能力，提高了疫苗的免疫原性。
- DOX - GMC 有效预防肿瘤发生：在小鼠体内实验中，接种 DOX - GMC 的小鼠在接种 B16 - F10 - Luc 细胞后，肿瘤生长受到明显抑制，部分小鼠存活时间延长，证明 DOX - GMC 疫苗具有一定的肿瘤预防效果，但仍需进一步改进。
- DOX - GMC 与 CD47 阻断增强巨噬细胞激活：利用鼠抗 CD47 单克隆抗体阻断肿瘤细胞表面 CD47 受体，结合 DOX 诱导的 DAMP 暴露，制备出 CD47 - DOX - GMC。该疫苗增强了巨噬细胞和 DC 对肿瘤细胞的吞噬作用，促进了巨噬细胞向 M1 型极化，增强了 DC 的成熟和抗原呈递能力，提高了疫苗的免疫原性。
- 疫苗产生持久的生存益处：与 DOX - GMC 相比，CD47 - DOX - GMC 在预防肿瘤生长方面表现更优，能显著提高小鼠的生存率，几乎完全抑制肿瘤组织的荧光信号。在治疗已存在的肿瘤时，CD47 - DOX - GMC 也展现出强大的清除能力，有效延长了小鼠的生存期。
- 疫苗促进肿瘤相关淋巴细胞和细胞因子产生：CD47 - DOX - GMC 疫苗激活了 CD4+和 CD8+ T 细胞，增加了 TH1 细胞的比例，抑制了调节性 T 细胞（Treg），改善了 T 细胞耗竭，诱导了肿瘤特异性 T 细胞反应和保护性免疫记忆，促进了肿瘤相关淋巴细胞和细胞因子的产生，从而实现了有效的抗肿瘤免疫治疗。
- 疫苗与免疫检查点抑制剂联合清除已建立的肿瘤：尽管 CD47 - DOX - GMC 疫苗在肿瘤预防和已存在肿瘤的清除方面取得了较好效果，但在治疗已建立的肿瘤时仍有提升空间。与免疫检查点抑制剂（抗程序性死亡配体 1，aPD - L1）联合使用后，显著增强了 T 细胞介导的肿瘤杀伤作用，提高了小鼠的生存率，有效清除了已建立的肿瘤。
- 自体肿瘤细胞可用于开发个性化疫苗：从荷瘤小鼠腹水中收集 B16 - F10 细胞，经富集后制备出腹水来源的 CD47 - DOX - GMC 疫苗。该疫苗在治疗小鼠已存在的肿瘤时，有效抑制了肿瘤生长，部分小鼠实现了肿瘤完全清除，证明利用自体肿瘤细胞开发个性化疫苗是可行的。
- 细胞内凝胶化结合细胞表面工程是一种平台技术：将细胞内凝胶化结合表面工程的方法应用于不同癌细胞系，如从皮下肿瘤组织获取的 4T1 细胞，制备出 CD47 - DOX - GBC 疫苗。该疫苗对皮下乳腺癌具有一定的抗肿瘤效果，与 aPD - L1 联合使用后效果更显著，表明该技术可用于制备多种癌症疫苗。
- 全细胞疫苗展现出良好的生物安全性：对健康小鼠进行的系统免疫毒性评估显示，接种 CD47 - DOX - GMC 疫苗的小鼠未出现明显的不良反应，心、肝、脾、肺、肾等器官无明显损伤，肝肾功能和炎症水平正常，证明该疫苗具有良好的生物安全性。
讨论
本研究通过细胞内凝胶化和细胞工程策略构建了 CD47 - DOX - GMC 疫苗，在肿瘤预防和治疗方面取得了显著效果。该疫苗利用细胞内水凝胶维持肿瘤细胞形态和抗原完整性，通过 DOX 预处理诱导 DAMP 过表达，结合 CD47 阻断增强免疫细胞对肿瘤细胞的识别和吞噬，激活了抗肿瘤免疫反应。同时，利用自体肿瘤细胞制备个性化疫苗，为克服肿瘤异质性提供了新途径。然而，该研究也存在一些局限性。CD47 阻断的疗效与肿瘤细胞 CD47 表达水平相关，在 CD47 低表达的肿瘤中可能效果不佳，且 CD47 与受体 SIRPα 的相互作用受遗传多态性影响，可能影响临床应用效果。此外，目前的研究仅在小鼠模型中进行，未充分模拟人类肿瘤微环境，还需在更多肿瘤模型和大动物模型中进行验证。未来的研究应进一步探索其他免疫逃逸蛋白阻断和 DAMP 暴露策略，优化疫苗制备工艺和质量控制，以推动该疫苗的临床转化。
