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这篇综述聚焦神经系统疾病中假外显子。阐述了前体 mRNA 剪接、剪接基序突变与疾病的关系，分析假外显子的致病机制，介绍针对其的反义寡核苷酸（ASO）干预策略，探讨了挑战与机遇，为相关研究和治疗提供参考。
引言
在人类遗传疾病研究中，寻找致病突变时多关注编码区突变。外显子组分析虽能找到部分突变，但仅能为不到 60% 的患者提供答案。高达 30% 的疾病相关遗传变异影响顺式作用剪接基序，这些突变对剪接的影响因情况而异，还可能产生多种剪接变体，增加了致病性预测的难度。其中，激活假外显子的突变尤其难以预测。携带假外显子的转录本通常保留完整功能编码序列，若能用剪接调节反义寡核苷酸（ASO）将假外显子从成熟转录本中排除，有望生成正常功能的 mRNA，因此精准鉴定假外显子突变可为靶向治疗带来机会。
前体 mRNA 剪接、剪接基序突变与疾病
多数人类基因含有内含子，转录后形成的前体 mRNA 需经过剪接过程，由剪接体去除内含子并连接外显子。可变剪接能产生多种转录本变体，增加基因表达和调控的复杂性。除规范外显子边界外的剪接被称为 “隐蔽” 剪接，它可能是低频未知功能事件、调控机制，也可能是突变的结果。
外显子选择和前体 mRNA 剪接受顺式元件影响，这些元件能被剪接因子识别和结合。突变若改变或创建剪接基序，会影响前体 mRNA 加工和转录本结构，可能产生非规范外显子。根据其产生原因和功能，非规范外显子可分为假外显子、隐蔽外显子和毒外显子等。假外显子通常由内含子深处的单核苷酸变异激活，其激活机制与转录调控机制相关，如毒外显子和递归剪接。递归剪接可逐步去除大内含子，单核苷酸变异若影响递归剪接区域的剪接基序，可能导致序列被选作假外显子。
假外显子与发病机制
假外显子激活难以预测，是一种未被充分报道的疾病机制。这是因为激活假外显子的突变类型多样，且内含子深处的变异常被常规基因组分析遗漏或无法确定其意义。此外，含假外显子的转录本常触发无义介导的 mRNA 衰变（NMD），增加了检测难度。
目前，基因组和转录组联合分析、新型计算工具、患者来源细胞模型等技术的应用，有助于揭示疾病机制。通过分析全基因组配对 DNA - RNA 测序，可发现内含子深处剪接突变热点，并对其致病性进行分类。
假外显子与干预机会
ASO 是设计用于靶向结合 RNA 并调节基因表达的短核酸类似物。虽有潜力克服假外显子突变，但针对神经发育障碍相关假外显子或隐蔽外显子的 ASO 策略较少。
Yamada 等人开发的 ASO 可促进致病性 WDR45 假外显子的跳跃，用于治疗发育迟缓及进行性运动障碍患者。针对 PCCA 丙酸血症患者的突变，也开发出能减少假外显子包含并恢复酶活性的 ASO，且该 ASO 无需跨越血脑屏障（BBB），可通过肝脏给药。
在四氢生物蝶呤缺乏症患者中，发现 PTS 基因的剪接变体，相关 ASO 能排除假外显子并挽救蛋白表达。Shah 等人报道，针对 FMR1 基因中导致脆性 X 综合征的假外显子的 ASO，可抑制剪接并增加 FMRP 水平，揭示了剪接与转录终止信号识别之间的新关系。
Stoke Therapeutics 公司的 STK - 001/Zorevunersen 2′ - MOE ASO 可减少 Dravet 综合征相关毒外显子的自然包含，增加 SCN1A 有效转录本水平，降低癫痫发作频率，且该方法不依赖特定突变。
异常 mRNA 是神经退行性疾病的标志，TARDBP 突变会导致剪接严格性降低，增加隐蔽外显子的包含，引起细胞应激和神经退行性变。针对 STMN2 基因隐蔽外显子的 ASO（QRL - 201）可纠正剪接，目前正在进行 I 期临床试验。此外，针对 UNC13A 基因中与疾病风险相关的隐蔽外显子的 ASO，可挽救 UNC13A 表达并恢复功能。
结论
假外显子作为治疗靶点，为中枢神经系统（CNS）疾病的 RNA 治疗带来机遇与挑战。大脑具有独特的基因表达模式和神经元特异性可变剪接事件，神经元等长寿命细胞对异常基因表达敏感。ASO 可调节目标前体 mRNA，产生正常功能转录本，这是小分子或基因替代疗法难以实现的。
目前已发现一些激活假外显子的反复突变，针对这些突变开发的剪接纠正疗法有望治疗多名患者。如针对 COL6A1 基因和 TIMMDC1 基因相关突变的治疗策略已取得一定成果。
然而，BBB 限制了核酸疗法在 CNS 疾病中的应用，多数 ASO 无法通过 BBB，需采用鞘内注射等方式，但这种方式存在分子分布复杂等问题。此外，CNS 神经元再生能力有限，要求治疗药物毒性极低。同时，ASO 向靶细胞的递送效率低、针对小群体定制 ASO 策略成本高，也阻碍了核酸疗法的广泛应用。不过，学术、非营利组织和特殊利益团体正在开展针对罕见病的 n-of-1 研究，相关监管指南也将推动 ASO 药物在罕见病治疗领域的发展。
