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本文聚焦三阴性乳腺癌（TNBC），综述了靶向内唾液酸蛋白（Endosialin）的嵌合抗原受体 T 细胞（CAR-T）疗法。探讨了 TNBC 现有治疗局限、CAR-T 疗法原理及靶点，详细阐述 Endosialin 作为靶点的优势、临床研究进展与挑战，为 TNBC 治疗提供新思路。
三阴性乳腺癌的治疗现状与挑战
三阴性乳腺癌（TNBC）患者目前主要治疗手段包括全身化疗、放疗和手术，但这些传统疗法常出现治疗失败、疾病复发等问题，预后较差，且会产生中到重度副作用。由于现有临床治疗导致的耐药性，降低了治疗效果，因此急需新的治疗方法。
CAR-T 细胞疗法概述
嵌合抗原受体 T 细胞（CAR-T）疗法在血液系统恶性肿瘤治疗中取得一定成效，但在实体瘤如 TNBC 的治疗上仍面临诸多挑战。CAR-T 细胞是经过免疫增强的 T 细胞，能够识别并杀死表达肿瘤相关抗原（TAA）的癌细胞。然而，实体瘤缺乏肿瘤特异性抗原，且存在免疫抑制和纤维化的肿瘤微环境，限制了 CAR-T 细胞对实体瘤的治疗效果。
CAR-T 细胞治疗的过程
CAR 由胞外域、跨膜域和胞内域三部分组成。其胞外域通常由单克隆抗体的可变域构建而成，通过铰链区连接到跨膜域和胞内域。跨膜域对 CAR 的信号传导和表面表达起着重要调节作用。CAR-T 细胞的制备需要从外周血单个核细胞（PBMCs）中分离 T 细胞，经过基因工程改造后回输到患者体内。在回输前，通常需要进行淋巴细胞清除化疗，以增强 CAR-T 细胞的信号转导和激活。
乳腺癌治疗中新型靶点的需求
4.1 CAR-T 疗法在实体瘤治疗中的挑战
实体瘤治疗中，寻找合适的肿瘤特异性抗原困难，且存在肿瘤内抗原异质性问题，导致 CAR-T 细胞难以识别所有癌细胞，进而引发疾病逃避和复发。此外，癌症组织分泌的趋化因子减少、细胞外基质（ECM）阻碍以及肿瘤微环境（TME）的免疫抑制作用，都限制了 CAR-T 细胞对实体瘤的治疗效果。
4.2 乳腺癌 CAR-T 细胞治疗的潜在靶点
肿瘤细胞表面的肿瘤特异性糖基化 TSAs（如 TnMUC1）以及一些过度表达的跨激活粘附分子（TAMs），如人表皮生长因子受体 2（HER2），都可能成为乳腺癌 CAR-T 细胞治疗的潜在靶点。但在靶向这些 TAA 时，需要谨慎考虑，因为 CAR-T 细胞可能会攻击健康组织。
4.3 受体酪氨酸激酶（RTK）
受体酪氨酸激酶（RTK）在细胞增殖、分化、代谢和存活等过程中发挥着关键作用。在乳腺癌患者中，一些 RTK 基因，如 HER2、EGFR 等，可能会出现过表达或异常表达。
4.4 TNBC 的 CAR-T 疗法的靶抗原
包括硫酸软骨素蛋白聚糖 4（CSPG4）、酪氨酸激酶 AXL、肿瘤内皮标记物 8（TEM8）、受体酪氨酸激酶（如 MET）、整合素 αVβ3（avb3）、EGFR 受体、酪氨酸激酶样孤儿受体 ROR1、叶酸受体 α（FRα）、间皮素（Mesothelin）等。这些靶抗原在 TNBC 的发生、发展中起重要作用，针对它们的 CAR-T 细胞疗法在临床前和临床试验中展现出一定的潜力。
内唾液酸蛋白作为有前景的靶点
内唾液酸蛋白（Endosialin），也称为肿瘤内皮标记物 1（TEM1）和 CD248，是一种 CTLD 组 14 跨膜糖蛋白。它主要在肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）和周细胞中表达，在正常组织中表达较弱。Endosialin 通过与多聚体蛋白 - 2 相互作用，促进肿瘤血管生成和成熟，为肿瘤细胞提供营养和氧气，同时还参与免疫逃逸和肿瘤微环境的调节。
5.1 内唾液酸蛋白在肿瘤微环境调节和免疫逃逸中的机制作用
Endosialin 在肿瘤微环境中具有多种功能，它能稳定肿瘤血管，促进肿瘤细胞的生长和转移。同时，它还能调节 T 细胞的浸润和激活，通过分泌免疫抑制细胞因子，如转化生长因子 -β（TGF-β）和白细胞介素 - 10（IL-10），抑制 T 细胞的增殖和功能，帮助肿瘤细胞逃避机体的免疫监视。
靶向内唾液酸蛋白治疗乳腺癌
6.1 上皮细胞衍生的癌症在 CAFs 和周细胞中表达内唾液酸蛋白
研究发现，在黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌等多种癌症中，内唾液酸蛋白在肿瘤相关成纤维细胞和周细胞中均有表达。在乳腺癌患者中，内唾液酸蛋白的高表达与疾病进展和淋巴结转移相关。
内唾液酸蛋白的结构、功能和表达
7.1 内唾液酸蛋白在不同癌症类型中的表达
内唾液酸蛋白在多种癌症中均有表达，不同癌症类型中其表达情况有所差异。在脑肿瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤等癌症中，内唾液酸蛋白的表达与肿瘤的恶性程度和转移相关。
内唾液酸蛋白在肿瘤血管生成和进展中的作用
内唾液酸蛋白与肿瘤血管生成密切相关。它能促进血管周细胞的迁移和增殖，参与肿瘤血管的形成和成熟。在多种癌症中，如肾细胞癌、胰腺癌等，内唾液酸蛋白的表达与肿瘤血管的密度和功能相关。
内唾液酸蛋白在乳腺癌中的过表达
大量研究表明，内唾液酸蛋白在乳腺癌中过表达。乳腺癌细胞系和患者来源的组织样本中，内唾液酸蛋白的 mRNA 和蛋白质水平均显著高于正常乳腺组织。且其过表达与乳腺癌的侵袭性特征相关，提示它可能参与肿瘤的血管生成。
乳腺癌治疗中靶向内唾液酸蛋白的理论依据
内唾液酸蛋白在肿瘤生物学中的重要作用，使其成为乳腺癌治疗的理想靶点。它在肿瘤血管中的表达，为靶向治疗提供了理论基础。通过抑制内唾液酸蛋白，可以限制肿瘤的生长和转移，同时减少对正常组织的损伤，有望提高治疗效果。
靶向内唾液酸蛋白的 CAR-T 细胞疗法的创新
研究人员通过克隆策略构建了针对内唾液酸蛋白的 CAR-T 细胞（E3K CAR），使用特定的逆转录病毒质粒进行亚克隆，替换原始的单链可变片段（scFv），并共表达人 CD34 的截短形式（hCD34）。
靶向内唾液酸蛋白的 CAR-T 细胞的开发
靶向内唾液酸蛋白的 CAR-T 细胞疗法在癌症免疫治疗中具有巨大潜力，尤其是对于乳腺癌等实体瘤。通过将内唾液酸蛋白特异性的单链可变片段（scFv）与细胞内信号域和共刺激域连接，构建 CAR-T 细胞。动物研究显示，这种 CAR-T 细胞能有效识别和清除癌细胞，抑制肿瘤生长和转移，目前正在进行临床试验以评估其安全性和有效性。
内唾液酸蛋白特异性 CAR 的设计和结构
与血液系统疾病相比，实体瘤给 CAR-T 细胞治疗带来更多挑战，如肿瘤异质性、不良微环境、细胞运输和侵袭困难以及毒性等。因此，近年来研究人员致力于改进 CAR 的设计，使其更适合实体瘤治疗，并寻找更有效的实体瘤细胞抗原。
靶向内唾液酸蛋白相较于其他抗原的优势
内唾液酸蛋白在肿瘤微环境中的内皮细胞和基质细胞中高表达，而在健康成人组织中低表达，这种独特的表达模式使其成为极具吸引力的治疗靶点，可降低脱靶效应的风险，减少对健康组织的损害。与其他仅参与组织细胞增殖的抗原不同，内唾液酸蛋白在肿瘤生长、转移和血管生成中起关键作用，靶向它可能对肿瘤生物学产生更显著的影响。
临床试验和转化潜力
所有 CAR-T 细胞疗法，包括靶向内唾液酸蛋白的疗法，都需要经过严格的监管测试，以确保其安全性和有效性。临床试验前需要大量的临床前数据支持，且 CAR-T 细胞治疗的制造过程复杂，需要严格的质量控制。目前，针对内唾液酸蛋白的 CAR-T 细胞疗法在临床试验中取得了一些成果，但也面临着诸多挑战，如患者选择、内唾液酸蛋白表达水平的差异、脱靶效应和免疫相关不良反应等。
15.1 受体酪氨酸激酶（RTK）
针对 cMET 和 ROR1 等受体酪氨酸激酶的 CAR-T 细胞疗法在临床试验中取得了一定的临床数据，但也面临着一些问题，如资金问题导致部分试验停止，以及需要进一步研究最佳剂量和安全性等。
15.2 细胞表面蛋白
部分细胞表面蛋白作为 CAR-T 细胞疗法的靶点已进入临床试验阶段，如间皮素，但仍有许多靶点处于临床前研究阶段。针对内唾液酸蛋白的免疫疗法，如 DNA 疫苗、抗体疗法等，在临床前研究中显示出一定的潜力。
临床转化中遇到的挑战或限制
靶向内唾液酸蛋白的治疗在 TNBC 的临床试验中显示出一定的前景，但仍存在许多问题。患者选择困难，内唾液酸蛋白表达水平差异大，难以广泛靶向；存在脱靶效应和免疫相关不良反应；临床前的成功难以转化为临床疗效，需要进一步优化治疗组合和给药策略。此外，CAR-T 细胞疗法还面临着技术挑战，如细胞在体内的增殖和潜在并发症，以及个性化 CAR-T 细胞制备的高成本和困难。
讨论
TNBC 的治疗面临诸多挑战，CAR-T 细胞疗法为其治疗带来了希望，但在靶向肿瘤特异性抗原时存在局限性。与传统靶点 EGFR 和 HER2 相比，内唾液酸蛋白具有独特的优势，如在肿瘤微环境中的特异性表达、参与肿瘤血管生成和免疫逃逸等多个过程。然而，内唾液酸蛋白靶向的 CAR-T 细胞疗法也面临着肿瘤内表达异质性和耐药机制等问题，需要进一步优化 CAR 设计以提高治疗效果。
结论
靶向内唾液酸蛋白的 CAR-T 细胞疗法在 TNBC 治疗中具有巨大潜力，但在临床转化过程中仍面临诸多挑战，如内唾液酸蛋白表达异质性的控制、脱靶损伤的预防和耐药机制的克服等。未来需要进一步研究和临床试验，优化 CAR-T 细胞设计，提高其安全性和有效性，以更好地应用于乳腺癌治疗，改善患者预后。
