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视网膜神经节细胞（RGCs）退变会引发多种致盲疾病，目前视网膜移植的干细胞来源尚未确定。研究人员探究睫状体（CB）细胞在体内分化和替代退变 RGCs 的潜力。结果发现 CB 和脑室下区（SVZ）细胞可整合进 RGCs 缺失的视网膜，且 CB 细胞效果更佳。这为视网膜神经退行性疾病治疗带来新方向。
在神秘的眼睛世界里，视网膜神经节细胞（RGCs）就像一群忠诚的 “信号传递员”，负责将眼睛收集到的视觉信息传递给大脑，让我们能够感知五彩斑斓的世界。然而，这些 “信号传递员” 十分脆弱，一旦受到损伤或发生退变，就会引发如青光眼、视网膜营养不良等多种严重的致盲性疾病。目前，针对视网膜退变的先进细胞疗法成为研究热点，其主要依赖神经保护和神经元替代这两种机制。但理想的用于视网膜移植的干细胞来源却一直未能确定。像是从非眼部来源的间充质干细胞（MSCs），虽然有研究报道其对 RGCs 有神经保护作用，可它存在诸多问题，比如无法整合进视网膜，还可能导致功能障碍、解剖结构重塑、胶质增生、免疫识别以及小胶质细胞激活等不良后果 。诱导多能干细胞（iPS）虽被寄予厚望，却也因为存在可能保留体细胞的表观遗传记忆、部分组织具有免疫原性等潜在风险，限制了它的应用。
在这样的困境下，来自西班牙穆尔西亚大学（University of Murcia）和阿利坎特神经科学研究所（Instituto de Neurociencias de Alicante）的研究人员决定踏上探索之旅，寻找新的治疗希望。他们将目光聚焦在了睫状体（CB）细胞上，开展了一项关于 “睫状体细胞在视网膜神经节细胞退变模型中的修复潜力” 的研究。最终，他们发现 CB 细胞和脑室下区（SVZ）细胞在特定条件下能够整合进 RGCs 缺失的视网膜，并且 CB 细胞在这一过程中表现更为出色，这一成果为视网膜神经退行性疾病的治疗带来了新的曙光。该研究成果发表在了《Scientific Reports》杂志上。
为了开展这项研究，研究人员运用了多种关键技术方法。在细胞获取方面，他们从成年或出生后的 C57BL/6Tg (CAG - EGFP) 小鼠中分别分离出 CB 细胞和 SVZ 细胞 。在动物模型构建上，通过对成年 C57/BL/6 小鼠进行视神经挤压（ONC）手术，建立 RGCs 退变模型。实验操作时，运用了玻璃体内注射技术，将分离得到的细胞注入小鼠视网膜。研究后期，采用免疫检测技术，使用针对特定蛋白的抗体来检测细胞标记物，进而分析细胞的分化和整合情况 。
下面来看看具体的研究结果：
- 玻璃体内注射神经干细胞对轴突切断视网膜的影响：研究人员首先验证了 CB 细胞的增殖和分化能力，发现其能生成神经球（Ns - CB），且在诱导分化过程中，细胞会失去色素沉着和 GFP 表达，并开始表达神经元标记物。随后，他们将 CB、Ns - CB 和 Ns - SVZ 细胞分别注入成年野生型小鼠视网膜，90 天后观察发现，这些细胞均在视网膜神经节细胞层上方形成了上皮膜，但未对视网膜内细胞数量产生影响，也未诱导胶质细胞激活，这表明玻璃体内注射这些细胞对视网膜神经元无毒且无不良影响。接着，在视神经挤压（ONC）后的小鼠视网膜中注射这些细胞，发现所有细胞类型都在 RGC 层上方形成上皮膜。与对照组相比，注射细胞的视网膜中 Brn3a+RGCs 数量显著增加，但由于 CB 细胞分化时会失去 GFP 表达，所以无法确定这些增加的细胞是源于神经保护作用还是细胞分化。
- 将睫状体细胞移植到 RGCs 缺失的视网膜中可增加表达神经节细胞标记的细胞数量：为了区分移植的神经干细胞是诱导轴突切断的 RGCs 产生神经保护作用，还是发生了分化，研究人员在 ONC 45 天后，即大多数 RGCs 及其轴突已经退变时，注射 CB、Ns - CB 或 Ns - SVZ 细胞，并在移植后 30 天和 90 天进行分析。结果发现，CB 或 Ns - CB 细胞注射的视网膜中，GFP 信号出现在通常由 Brn3a 细胞占据的层中，Ns - SVZ 细胞注射的视网膜中，GFP 信号出现在内核层。分析还显示，移植后 30 天和 90 天，注射 CB 和 Ns - CB 细胞的视网膜中 Brn3a+细胞数量显著增加，且这些细胞可能分化为 RGCs。此外，注射 Ns - SVZ 细胞的视网膜中，90 天后 Brn3a+细胞数量也有所增加，但比 CB 细胞所需时间更长。同时，研究人员还检测了其他 RGCs 标记物，发现注射 CB 和 Ns - CB 细胞的视网膜中，表达 RBPMS 和 βIII - tubulin 的细胞数量显著增加，这进一步表明 CB 和 Ns - CB 细胞具有表达 RGC 标记物的能力，而 SVZ 细胞虽然也能分化为神经元，但成熟过程较为缓慢。
综合上述研究结果，研究人员得出结论：CB 和 SVZ 细胞是治疗影响 RGCs 的神经退行性疾病的潜在有希望的细胞来源。它们不仅具有持续的神经保护特性，免疫耐受性好，而且在 RGCs 缺失后有分化为 RGCs 的潜力。其中，CB 细胞或体外扩增的 Ns - CB 细胞比 SVZ 细胞更有效，Ns - CB 细胞还因其可体外扩增的特性，为建立临床应用的细胞库提供了可能。不过，目前仍有一些问题有待进一步研究，比如如何在体内刺激内源性 CB 细胞用于视网膜治疗，以及能否将相关研究扩展到其他视网膜神经元等。这项研究为视网膜神经退行性疾病的治疗开辟了新的方向，为未来的临床治疗带来了新的希望，让我们对攻克这些致盲性疾病有了更多的期待。
