Snord67通过调控U6 RNA甲基化及剪接图谱促进乳腺癌淋巴结转移的机制研究

为解决乳腺癌转移机制不明的难题，研究人员聚焦非编码RNA领域，发现snoRNA家族成员Snord67通过指导U6 snRNA的2'-O-甲基化修饰（C60位点）调控选择性剪接，进而驱动淋巴结转移和远端扩散。该研究发表于《Nature Communications》，为乳腺癌靶向治疗提供了新思路。

　　

乳腺癌转移是导致患者死亡的主要原因，其中淋巴结转移与不良预后密切相关。然而，淋巴结转移如何促进远端转移的分子机制尚不清楚。近年来，小核仁RNA（snoRNA）在癌症中的作用逐渐受到关注，但其在转移过程中的功能仍知之甚少。传统观点认为snoRNA是维持细胞基本功能的"看家基因"，但越来越多的证据表明它们参与肿瘤发生发展。特别是在乳腺癌中，snoRNA是否通过调控RNA修饰影响转移过程，是一个亟待解答的科学问题。

美国北卡罗来纳大学Lineberger综合癌症中心的研究团队通过多组学分析和功能实验，首次揭示了box C/D型snoRNA成员Snord67在乳腺癌淋巴结转移中的关键作用。研究发现Snord67通过指导U6小核RNA（snRNA）C₆₀位点的2'-O-甲基化修饰，改变全局剪接模式，从而促进肿瘤细胞在淋巴结微环境中的适应性和转移能力。这一重要发现发表在《Nature Communications》杂志上。

研究采用了多种关键技术方法：通过CRISPR/Cas9构建Snord67基因敲除的乳腺癌细胞系；建立免疫活性小鼠模型模拟淋巴结转移过程；运用Nm-VAQ（2'-O-甲基化验证与绝对定量）技术检测U6 snRNA修饰水平；采用RNA-seq和RibOxi-seq分析转录组和RNA修饰谱；对24对临床乳腺癌原发灶和淋巴结转移样本进行测序分析。

Many snoRNAs are upregulated in lymph node metastases
研究人员首先通过微阵列分析比较了乳腺脂肪垫肿瘤、腋窝淋巴结肿瘤和肺转移灶中非编码RNA的表达差异。令人惊讶的是，在差异表达的ncRNA中，snoRNA占比高达67%，远高于其在所有检测RNA中的比例（12%）。其中Snord67和Snord111在淋巴结转移灶中表达显著上调，这一发现在自发转移模型中得到了验证。

Loss of Snord67 decreases proliferation and tumorigenesis
通过CRISPR/Cas9技术构建Snord67敲除细胞系后，研究发现敲除Snord67会显著抑制乳腺癌细胞的集落形成和球体生长能力。重要的是，回补野生型Snord67能恢复这些表型，而无法指导U6甲基化的突变体（G97C）仅能部分挽救，表明Snord67的功能依赖于其指导RNA修饰的能力。

Snord67 is necessary for LN tumor growth and distant metastasis
在免疫活性小鼠模型中，Snord67敲除显著抑制了淋巴结肿瘤的生长和肺转移的发生。通过反义寡核苷酸（ASO）抑制Snord67表达也获得了类似效果。值得注意的是，Snord67敲除对经血行转移建立的肺转移灶影响较小，提示其作用可能更倾向于淋巴转移途径。

Snord67 knockout leads to changes in the splicing landscape
RNA-seq分析显示，Snord67敲除导致1158个基因发生差异剪接，其中外显子跳跃（cassette exon）和内含子滞留（intron retention）事件最为显著。RibOxi-seq证实Snord67特异性指导U6 snRNA C₆₀位点的2'-O-甲基化修饰。引人注目的是，Snord67敲除提高了整体剪接效率，表现为内含子滞留比例降低。

Snord67 is associated with differential alternative splicing in breast cancer patients
在临床样本中，MYO18A外显子40和NFYA外显子3的剪接变化与Snord67表达水平显著相关。这些剪接变异在乳腺癌中已被证实与不良预后相关，为Snord67的临床意义提供了直接证据。

Snord67 expression is associated with subtype and prognosis in breast cancer patients
TCGA数据分析显示，Snord67高表达与基底型和Luminal B型乳腺癌的不良预后相关，其宿主基因CKAP5的表达也与患者生存率显著相关。

这项研究首次系统阐明了snoRNA通过调控RNA修饰影响癌症转移的分子机制，突破了传统上对snoRNA功能的认知局限。研究发现Snord67通过"RNA修饰-剪接重编程-转移表型"的全新通路促进乳腺癌进展，为开发针对RNA修饰过程的抗癌疗法提供了理论依据。特别是ASO抑制Snord67展现出的治疗效果，提示靶向snoRNA可能成为抑制转移的新策略。该研究不仅深化了对乳腺癌转移机制的理解，也为其他癌症的RNA修饰研究提供了重要参考。