Wnt5a/ROR1 信号通路：慢性淋巴细胞白血病（CLL）侵袭进展的关键驱动因素

慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞的迁移和浸润是疾病进展的关键因素。研究人员针对 CLL 细胞中 MMP-9 表达差异展开研究。结果发现 Wnt5a 通过 ROR1 激活 NF-κB 增强 MMP-9 表达，促进 CLL 细胞侵袭。这为 CLL 治疗提供了新靶点和联合治疗思路。

　　在血液疾病的研究领域，慢性淋巴细胞白血病（Chronic Lymphocytic Leukemia，CLL）一直是科学家们重点关注的对象。CLL 是一种以骨髓和淋巴组织中克隆性 B 细胞积累为特征的疾病，这些白血病细胞会在血液和淋巴组织间循环，而这一过程离不开它们突破内皮屏障和穿过细胞外基质（Extracellular Matrix，EM）的能力，基质金属蛋白酶 - 9（Matrix Metalloproteinase-9，MMP-9）在其中发挥着关键作用。已有研究表明，CLL 患者体内 MMP-9 水平较高时，疾病进展更为迅猛，患者的临床预后也更差。但对于 CLL 细胞中 MMP-9 表达差异的原因，以及背后的调控机制，科学界还尚未完全明晰。为了深入探索这些问题，来自美国加利福尼亚大学圣地亚哥分校（University of California San Diego）Moores 癌症中心新型治疗中心的研究人员 Md Kamrul Hasan、George F. Widhopf II 等人展开了一系列研究，相关成果发表在《Leukemia》杂志上。

研究人员主要运用了细胞侵袭实验、ELISA 测定、CRISPR/Cas9 编辑等技术。细胞侵袭实验用于评估 CLL 细胞的侵袭能力；ELISA 测定可检测 MMP-9 的表达水平；CRISPR/Cas9 编辑则用来对相关基因进行敲除操作。研究中的血液样本来自加利福尼亚大学圣地亚哥分校 Moores 癌症中心符合 CLL 诊断标准的患者，实验动物相关操作也严格遵循相关规范。

研究结果如下：

1. ROR1^Pos CLL 细胞具有高 MMP-9 水平和侵袭能力：通过免疫印迹分析发现，ROR1^Pos CLL 细胞中 MMP-9 水平显著高于 ROR1^Neg CLL 细胞。在细胞侵袭实验中，Wnt5a 刺激可增强 ROR1^Pos CLL 细胞对趋化因子 CXCL12 的侵袭能力，而对 ROR1^Neg CLL 细胞无此作用。在小鼠实验中，ROR1xTCL1 dTg 小鼠的白血病细胞中 MMP-9 水平更高，且 Wnt5a 刺激后其侵袭能力增强更明显。
2. Wnt5a 通过 ROR1 依赖机制增强 MMP-9 表达和侵袭能力：培养实验表明，Wnt5a 可使 ROR1^Pos CLL 细胞中 MMP-9 水平随时间增加，而抗 ROR1 抗体 zilovertamab 可抑制这一过程。在细胞侵袭实验中，Wnt5a 增强的侵袭能力也可被 zilovertamab 阻断。在 CLL 衍生细胞系 MEC1 的实验中，过表达 ROR1 的 MEC1-ROR1 细胞 MMP-9 表达更高，侵袭能力更强；敲除 Wnt5a 后，细胞 MMP-9 表达和侵袭能力下降。ELISA 测定显示，Wnt5a 可促进 MMP-9 释放到培养基中，且该过程不依赖 BTK 或 CXCR4 信号通路。
3. MMP-9 对 Wnt5a/ROR1 增强 CLL 细胞侵袭性至关重要：免疫印迹分析和细胞侵袭实验表明，用靶向 MMP9 的 siRNA 或 MMP-9 抑制剂处理 CLL 细胞，可抑制 Wnt5a 增强的趋化因子导向的细胞侵袭能力，说明 MMP-9 在 Wnt5a/ROR1 增强 CLL 细胞侵袭中起关键作用。
4. Zilovertamab 可阻断 Wnt5a 增强的 MMP-9 表达和侵袭性：免疫印迹分析显示，BTK 抑制剂 ibrutinib 或 zanubrutinib 不能抑制 Wnt5a 增强的 MMP-9 表达，而 zilovertamab 可以。细胞侵袭实验也表明，zilovertamab 可阻断 Wnt5a 增强的侵袭性，而 BTK 抑制剂不能。联合使用 zilovertamab 和 ibrutinib 对抑制 CLL 细胞侵袭有协同作用。
5. Wnt5a/ROR1 信号诱导 NF-κB 激活以增强 MMP-9 表达：免疫印迹分析显示，NF-κB 抑制剂可抑制 Wnt5a 增强的 CLL 细胞 MMP-9 表达。转染靶向 NF-κB-p65 的 siRNA 后，CLL 细胞中 NF-κB-p65 表达降低，Wnt5a 不能诱导其 MMP-9 表达增加和侵袭能力增强。Zilovertamab 可抑制 Wnt5a 诱导的 NF-κB-p65 磷酸化，而 ibrutinib 不能。
6. CLL 细胞与骨髓间充质基质细胞共培养可增强 MMP-9 表达和侵袭性：CLL 细胞在骨髓间充质基质细胞条件培养基（MSC-CM）或护士样细胞条件培养基（NLC-CM）中培养，MMP-9 表达和侵袭能力增强。Zilovertamab 或 ibrutinib 处理可抑制这种增强作用，联合使用二者抑制效果更明显。

研究结论表明，Wnt5a 通过 ROR1 激活 NF-κB，进而上调 MMP-9 的表达和释放，增强 CLL 细胞的侵袭能力，促进疾病进展。BTK 抑制剂无法抑制 Wnt5a 诱导的 NF-κB 激活和 MMP-9 表达，这可能是 CLL 患者对 BTK 抑制剂治疗产生耐药性的机制之一。而联合使用 zilovertamab 和 BTK 抑制剂，对抑制 CLL 细胞侵袭具有协同作用，为 CLL 的治疗提供了新的联合治疗策略和潜在的治疗靶点，对推动 CLL 的临床治疗发展具有重要意义。