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口蹄疫(FMD)诊断面临难题,研究人员开发针对 FMD 病毒 2B-NSP 编码区的比色 RT-LAMP 检测法。添加牛血清白蛋白(BSA)可缩时,该法灵敏度高、特异性强。能快速筛查样本,避免污染,助力 FMD 防控。
口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是偶蹄动物的一种高度传染性病毒性疾病。快速、早期且准确地诊断这种疾病,对于口蹄疫的迅速控制至关重要。虽然基于聚合酶链式反应(PCR)的检测方法常用于口蹄疫的有效诊断,但这些方法检测扩增的病毒基因组时,需要精密设备、专业人力和复杂程序。针对病毒基因组阳性扩增有明显颜色变化的比色等温扩增检测法,可在实验室和现场对口蹄疫病毒(FMDV)进行快速、简便的诊断。
在此,研究人员开发并评估了基于 FMDV 2B - 非结构蛋白(NSP)编码区的比色 RT-LAMP 检测法,用于病毒基因组的泛血清型检测。添加 1mg/ml 的牛血清白蛋白(BSA)作为添加剂,可将 RT-LAMP 检测的时间从 60 分钟 / 反应缩短至 30 分钟 / 反应。分析灵敏度测试表明,该 RT-LAMP 检测法每个反应最多可检测到 1000 个 FMDV 基因组拷贝。同时,用过去二十年在印度流行的 O、A 和 Asia1 血清型进行检测时发现,该检测法对 FMDV 基因组的检测具有特异性。此外,对该国各地口蹄疫病毒现场疫情的 312 份临床样本进行分析,结果显示 RT-LAMP 检测法的灵敏度为 96.07%,特异性为 100%,总体准确率为 97.12%。
因此,由于扩增产物可通过肉眼明显观察到颜色变化(从粉红色变为黄色),RT-LAMP 检测法有助于在不使用有害 DNA 结合染料的情况下,快速筛查疑似口蹄疫的临床样本,同时可防止扩增产物形成气溶胶,避免诊断实验室后续的交叉污染。