编辑推荐:
2′- 岩藻糖基乳糖(2′-Fucosyllactose)是婴儿生长必需营养物质,谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)无法合成。研究人员对谷氨酸棒杆菌 ATCC13032 进行工程改造,成功使其利用岩藻糖和乳糖生产 2′- 岩藻糖基乳糖,产量达 2.07 g/L,为婴儿营养领域带来新突破。
2′- 岩藻糖基乳糖(2′-Fucosyllactose)是人类母乳中含量最丰富的低聚糖,也是婴儿生长所需的三种必需营养素之一。谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)是常见的工业发酵细菌,但它无法合成 2′- 岩藻糖基乳糖。在这项研究中,研究人员对谷氨酸棒杆菌 ATCC13032 进行改造,使其能够利用岩藻糖(fucose)和乳糖(lactose)生产 2′- 岩藻糖基乳糖。
研究人员对来自幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)的编码 α - 1,2 - 岩藻糖基转移酶(α-1,2-fucosyltransferase)的基因 futC 进行了密码子优化,并对四个氨基酸(F40S/Q150H/C151R/Q239S)进行了突变。将修饰后的基因 futC 和来自多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)的编码岩藻糖激酶 / 鸟苷二磷酸 - 岩藻糖焦磷酸化酶(fucokinase/GDP-fucose pyrophosphorylase)的基因 fkp 在质粒 pEC 中过表达,然后转化到谷氨酸棒杆菌中,得到菌株 CW002。然而,CW002 无法合成 2′- 岩藻糖基乳糖,这可能是因为底物岩藻糖和 / 或乳糖无法穿过细胞膜。
于是,研究人员又将来自大肠杆菌(Escherichia coli)的编码乳糖通透酶(lactose permease)的基因 lacY 和编码岩藻糖通透酶(fucose permease)的基因 fucP 在质粒 pXTuf 中过表达,并转化到 CW002 中,得到菌株 CW006。不出所料,CW006 成功合成了 2′- 岩藻糖基乳糖。有趣的是,当改变这四个基因的表达组合时,2′- 岩藻糖基乳糖的产量会下降甚至停止,这表明 CW006 中这四个基因的表达水平可能需要达到良好的平衡。最终,谷氨酸棒杆菌 CW006 在 2.4 升生物反应器中生产出了 2.07 克 / 升的 2′- 岩藻糖基乳糖。