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葡萄叶卷病严重影响葡萄健康，为探究其病因，研究人员对希腊葡萄样本进行研究。通过高通量测序（HTS）和 RT-PCR 技术，首次在希腊葡萄中发现葡萄基齐尔萨帕克病毒（GKSV），这增加了对影响植物健康未知病毒的认识。
在广袤的葡萄园里，葡萄树就像勤劳的 “水果生产者”，为人们带来美味的葡萄和香醇的葡萄酒。然而，一种神秘的疾病正悄然威胁着它们的健康，那就是葡萄叶卷病。这一疾病让葡萄叶出现卷曲、变色等症状，严重影响葡萄的产量和品质，就像给葡萄树施了一道 “紧箍咒” 。多年来，科学家们一直在努力寻找引发叶卷病的 “幕后黑手”，因为只有找到病因，才能 “对症下药”，保护葡萄树，保障葡萄酒产业的稳定发展。
在这样的背景下，来自亚里士多德大学塞萨洛尼基分校（Aristotle University of Thessaloniki）植物病理学实验室的研究人员 Polina Panailidou、Leonidas Lotos 和 Varvara I. Maliogka 展开了深入研究。他们将目光聚焦在葡萄基齐尔萨帕克病毒（Grapevine Kizil Sapak virus，GKSV）上，这种病毒此前已在多个国家被发现，但在希腊却从未有过相关报道。此次研究成果发表在《Journal of Plant Pathology》杂志上，为葡萄病害研究领域带来了新的发现。
研究人员主要运用了两种关键技术：高通量测序（High-Throughput Sequencing，HTS）和逆转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）。研究样本来自希腊中部蒂尔纳沃斯（Tyrnavos）的葡萄园，选取表现出叶卷病症状的黑麝香（Black Muscat）品种葡萄树进行研究。
研究结果如下：
首先，研究人员从一株黑麝香葡萄树样本（NTV-4）的韧皮部刮取物中提取总 RNA，利用 HTS 技术在 NovaSeq6000 平台上进行测序。经过对约 5600 万个 101bp 的双端读数进行从头组装和 BLAST 分析后，发现了一个 7567 个核苷酸（nt）的重叠群，它与 GKSV 分离株 “KR2”（LC541735.1）的核苷酸序列同一性达到 85.63% 。由此确定了希腊中部 GKSV 分离株 NTV-4/15 的存在，并将其序列存入 GenBank，登录号为 PV173705。
其次，为了进一步确认 GKSV 的存在，研究人员设计了一套引物 [GKSV_F_6616（5’-TGACAAGATGCCCAARYTGTG-3’）/GKSV_R_7340（5’-CYTCCYTGTCCCACCTCAT-3’）]，通过 RT-PCR 技术扩增出衣壳蛋白和假设蛋白（ORF4）基因的 725nt 片段。对扩增产物进行桑格测序（Sanger sequencing）后发现，样本 NTV-4 中 GKSV 的核苷酸序列与 HTS 获得的序列完全相同，与 GKSV 分离株 “70”（MN172167.1）的序列同一性为 93.70% 。
最后，研究人员利用上述引物对同一葡萄园的另外 31 株葡萄树进行检测，结果发现只有一株与 NTV-4 来自同一葡萄园的葡萄树感染了 GKSV。
研究结论表明，此次研究首次在希腊葡萄中发现 GKSV。这一发现具有重要意义，它增加了已知感染葡萄的病毒种类，进一步揭示了葡萄叶卷病潜在的致病因素。尽管目前 GKSV 对葡萄植株健康的影响尚不明确，但这一发现为后续研究指明了方向。未来，研究人员可以围绕 GKSV 对葡萄生长发育、产量和品质的影响展开研究，探索有效的防控措施，从而为保护葡萄产业提供有力支持。同时，此次研究也为其他地区监测和防控 GKSV 提供了宝贵经验，有助于全球葡萄种植业的健康发展。
