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睡眠与健康息息相关，而褪黑素（Melatonin）在调节睡眠 - 觉醒周期中起关键作用。为准确检测唾液褪黑素以诊断昼夜节律睡眠 - 觉醒障碍（CRSDs），研究人员开发了竞争酶联适配体分析法（ELAA）。该方法灵敏度高，检测限达 2.5×10-12 M，有望改善相关疾病诊断与治疗。
在现代社会，睡眠问题困扰着越来越多的人。褪黑素作为调节睡眠 - 觉醒周期的关键激素，其在体内的分泌规律与昼夜节律紧密相连。每天临近睡眠时间，褪黑素分泌增加，促使人们产生困意。因此，准确测量暗光下褪黑素起始分泌时间（dim light melatonin onset，DLMO），对于了解人体昼夜节律、诊断睡眠 - 觉醒周期紊乱至关重要。然而，传统检测唾液中褪黑素的方法存在诸多弊端。一些方法操作复杂，另一些则灵敏度欠佳，尤其在检测低浓度褪黑素时，难以满足精准评估 DLMO 的需求。比如，对于老年人或患有神经退行性疾病的人群，他们体内褪黑素水平较低，传统检测方法常常力不从心。在这样的背景下，来自加拿大拉瓦尔大学（Université Laval）、萨斯喀彻温大学（University of Saskatchewan）等机构的研究人员开展了一项极具意义的研究。他们致力于开发一种新型检测方法，以更准确地检测唾液中的褪黑素。经过不懈努力，研究人员成功开发出一种竞争酶联适配体分析法（enzyme - linked aptamer - based assay，ELAA）。这一成果意义非凡，它为准确测定 DLMO 带来了新的希望，有助于精准诊断昼夜节律睡眠 - 觉醒障碍（circadian rhythm sleep - wake disorders，CRSDs），从而使医疗保健人员能够根据个体独特的昼夜节律，优化治疗和行为干预的时机与选择，为改善睡眠障碍患者的生活质量提供有力支持。该研究成果发表在《Scientific Reports》上。
研究人员在这项研究中运用了多种关键技术方法。首先是适配体技术，他们选用了化学合成的单链 DNA 适配体，这种适配体能够高度特异性且灵敏地结合褪黑素。其次是竞争酶联免疫分析技术，通过让样本中的未标记褪黑素与标记抗原（MLT - OVA）竞争结合捕获适配体，根据结合情况产生的信号来检测褪黑素含量。在样本处理方面，研究人员收集了健康志愿者的唾液样本，并对其进行离心、过滤等处理，以排除干扰物质。
研究结果如下：
- 检测条件优化：通过棋盘滴定法优化了竞争剂 MLT - OVA 和褪黑素适配体的浓度。结果显示，6.25 μM 的褪黑素适配体与 5 μg/mL 的 MLT - OVA 组合，能在不过度饱和 MLT - OVA 结合位点的情况下，产生可测量的吸光度信号，为 ELAA 检测提供了最佳的灵敏度平衡。
- 检测性能评估：在优化条件下构建的剂量 - 反应曲线表明，该检测方法的动态范围为 8.62×10-6 M 至 3.9×10-11 M。根据测量数据计算得出的校准曲线方程为 Absorbance = - 0.03940 * log [MLT]+0.1948（R2=0.9696）。检测限（limit of detection，LOD）达到 2.5×10-12 M，曲线所有数据点的相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）为 1.92 ± 1.06%（mean ± S.D.），展现出良好的检测性能。
- 特异性测试：研究人员使用与褪黑素结构相似的分子（L - 色氨酸（L - TRP）、血清素（SER）、N - 乙酰 - 5 - 羟色胺（NAT）和 5 - 甲氧基色胺（5 - MT））进行特异性测试。结果发现，大多数对照靶标与适配体的结合较少，主要与竞争剂 MLT - OVA 结合，仅 L - TRP 在高浓度时与适配体有少量结合，证明了该检测方法具有较高的特异性。
- 加标回收研究：在经过处理的真实唾液样本中进行加标回收测试，分别加入 4.6 ng/mL、0.46 ng/mL 和 0.046 ng/mL 的褪黑素。结果显示，回收率在 79% - 126% 之间。虽然回收率存在一定波动，可能是由于校准使用的缓冲液与人体唾液成分不完全一致，但总体表明该方法在实际样本检测中具有一定的可行性。
在研究结论和讨论部分，研究人员开发的竞争 ELAA 在检测唾液褪黑素方面展现出显著优势。其高灵敏度和较宽的动态范围，使其能够有效检测低浓度的褪黑素，这对于准确测定 DLMO 具有重要意义，特别是对于那些褪黑素水平极低的人群。此外，该方法对结构相似的对照靶标结合极少，特异性良好。然而，研究也指出了目前存在的一些问题，如在加标回收实验中，由于校准缓冲液与人体唾液成分的差异，导致回收率存在波动。未来研究需要使用更接近人体唾液成分的校准物，如人工唾液，来进一步优化校准曲线，提高检测的准确性和可靠性。总体而言，这项研究为唾液褪黑素检测提供了新的有效方法，为后续准确诊断 CRSDs 及相关疾病奠定了坚实基础，有望推动睡眠医学领域的进一步发展，帮助更多受睡眠障碍困扰的患者改善健康状况。
