重磅发现：Rapavir—— 高效阻断乙肝病毒入侵的新型 NTCP 抑制剂

慢性乙肝病毒（HBV）感染治疗棘手，NTCP 是 HBV 入侵关键靶点。研究人员筛选 rapafucin 库，发现 Rapavir。它能强效抑制 NTCP，阻断 HBV 感染，在小鼠模型中有效且无明显副作用，为抗 HBV 药物研发带来新希望。

　　

乙肝，这个隐匿在全球健康版图中的 “无声杀手”，长期以来困扰着无数人。慢性乙肝病毒（HBV）感染如同顽固的 “钉子户”，不仅和各类肝脏疾病紧密挂钩，还让现有的临床治疗手段陷入困境。目前的治疗方案往往难以彻底清除病毒，无法实现治愈，这就像在黑暗中摸索却找不到出口，使得开发全新的治疗方法成为医学领域亟待攻克的难题。

在这场和乙肝病毒的较量中，钠 - 牛磺胆酸共转运多肽（NTCP）成为了关键的 “战场”。它被证实是 HBV 入侵人体细胞的功能性受体，就好比是病毒进入细胞的 “钥匙孔”，只要能找到一把合适的 “钥匙” 来堵住这个 “钥匙孔”，就能阻止病毒入侵。于是，开发针对 NTCP 的新型抑制剂，成为了对抗 HBV 的新希望。然而，此前开发的小分子抑制剂大多表现不佳，要么抑制效力低下，要么在体内效果甚微，仿佛是拿着钝剑上战场，难以对病毒造成有效打击。

在这样的背景下，重庆医科大学的研究人员勇挑重担，开启了一场寻找 “神兵利器” 的科研之旅。他们受到天然产物雷帕霉素（rapamycin）和 FK506 的启发，构建了一个名为 rapafucins 的大环化合物库。经过层层筛选，他们发现了一种名为 Rapavir（原名 JH - B10）的化合物，它就像一颗闪耀的 “新星”，在对抗 HBV 的战斗中展现出了巨大的潜力。

研究人员发现，Rapavir 对 NTCP 有着强大的抑制能力，能显著阻断 HBV 的入侵。在体外实验中，它对牛磺胆酸 - d₄（TCA - d₄）摄取以及 HBV 感染的抑制效果十分突出，IC₅₀值表现优异。在体内实验中，通过人肝嵌合 uPA/SCID 小鼠模型验证，Rapavir 能有效降低血清和肝脏中的 HBV DNA、HBeAg、HBV cccDNA 以及 HBV RNA 水平，而且在高剂量下也没有明显的毒副作用。这一成果就像是在黑暗中点亮了一盏明灯，为乙肝的治疗带来了新的曙光，它不仅为 NTCP 功能研究提供了新的化学工具，还成为了抗 HBV 药物开发的潜力候选者。

为了开展这项研究，研究人员主要运用了以下关键技术方法：首先是 3D 微阵列筛选技术，从包含 3918 个 rapafucins 的库中筛选出潜在的 NTCP 抑制剂；其次是结构 - 活性关系（SAR）研究，通过对化合物结构的改造和测试，优化其抑制活性；然后利用亲和力拉下实验，证实 Rapavir 与 NTCP 的直接相互作用；代谢分析则用于评估 Rapavir 对 NTCP 抑制的特异性；最后借助人肝嵌合小鼠模型，评估 Rapavir 在体内的抗病毒效果 。

下面详细介绍研究结果：

• Rapavir 的发现：研究人员构建 rapafucin 3D 微阵列，对 3918 个 rapafucins 进行筛选，得到 15 个潜在的 NTCP 抑制剂。其中 HP07 - C6 展现出一定活性，随后通过 SAR 研究对其结构改造，合成并测试 71 个类似物，最终发现 JH - B10（即 Rapavir）的抑制活性显著提升。
• Rapavir 与 NTCP 的相互作用及特异性：合成生物素标记的 Rapavir 亲和探针，通过亲和拉下实验证明 Rapavir 能直接与 NTCP 相互作用，且这种结合能被游离的 Rapavir 竞争性抑制。代谢分析显示，Rapavir 处理后，细胞内结合型胆汁酸水平显著变化，表明其对 NTCP 具有较高特异性。同时，实验证实 Rapavir 的抑制作用不依赖于 FKBP12 蛋白。
• Rapavir 对 HBV 感染的影响：在 HepG2 - NTCP 细胞实验中，在接种 HBV 颗粒前用 Rapavir 预处理细胞，能浓度依赖性地降低细胞内 HBV cccDNA 和 HBV RNA 水平，以及细胞外 HBeAg 和 HBsAg 水平；而在接种 HBV 后添加 Rapavir，其保护作用几乎消失，说明 Rapavir 在 HBV 感染阶段发挥抗病毒作用，直接阻断 NTCP，而非影响病毒复制过程。
• Rapavir 的体内抗病毒效果：在人肝嵌合 uPA/SCID 小鼠实验中，感染 HBV 前及感染后多次给予 Rapavir（2mg/kg 体重），与对照组相比，治疗组小鼠血清中的 HBV DNA 和 HBeAg 水平上升明显延缓，8 周后肝脏中的 HBV cccDNA 和 HBV RNA 水平显著降低，且 Rapavir 在高达 16mg/kg 剂量下对小鼠无明显毒性。

综合来看，这项研究意义重大。Rapavir 作为一种新型的 NTCP 抑制剂，不仅抑制活性强、特异性高，还在体内外实验中展现出良好的抗 HBV 效果，且无明显副作用。它的出现为乙肝治疗领域注入了新的活力，有望成为新一代抗 HBV 药物研发的重要方向，也为后续深入研究 NTCP 的功能以及乙肝病毒感染机制提供了有力的工具，推动了整个生命科学和健康医学领域对乙肝相关问题的探索进程。