编辑推荐：
黑色素瘤是致命皮肤癌，NRAS 突变常见。为解决 ctDNA 检测难题，研究人员开发 NRAS PASEA 检测法。该方法能超灵敏检测 NRAS 突变 ctDNA，在黑色素瘤诊断、疗效评估等方面意义重大。
黑色素瘤，这个名字听起来就让人不寒而栗，它是皮肤癌中最为致命的一种。NRAS 基因，在黑色素瘤的发生发展中扮演着极为关键的角色，其突变频繁出现。在黑色素瘤的治疗战场上，尽管医疗技术不断进步，但对于转移性黑色素瘤患者来说，治疗效果依旧难以令人满意。NRAS 突变会激活下游的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路，这一通路在黑色素瘤的进展过程中起到了推波助澜的作用，因此也成为了治疗的重要靶点。近年来，液体活检技术崭露头角，它通过检测血液中的循环肿瘤 DNA（ctDNA），为癌症诊断带来了新的希望。然而，ctDNA 在血液中含量极少，仅占总循环游离 DNA（cfDNA）的 0.01 - 10%，而且还要在大量野生型等位基因的 “重重包围” 下检测出突变的 ctDNA，难度可想而知。目前常用的下一代测序（NGS）和微滴数字 PCR（ddPCR）技术，虽然各有优势，但高昂的成本和较长的检测时间，使得它们难以在临床上广泛应用。在这样的困境下，开发一种更灵敏、更便捷的 ctDNA 检测方法迫在眉睫。
为了解决这些难题，研究人员积极探索。此次研究由未知研究机构的研究人员开展，他们成功开发出 NRAS PASEA 检测法，这一成果为黑色素瘤的诊疗带来了新的曙光。该研究成果发表在《Cancer Genetics》上。
研究人员为开展此项研究，运用了多种关键技术方法。首先，通过筛选 CRISPR - Cas 蛋白来构建 NRAS PASEA 检测体系。他们合成特定的 crRNA，并将其与 CRISPR - Cas 蛋白按 1:10 摩尔比混合，组装成 Cas - crRNA 核糖核蛋白（RNP）复合物。同时，合成用于检测 NRAS 野生型、Q61R 和 Q61K 变体的 DNA 片段，以此来比较不同 CRISPR - Cas 蛋白的切割效率。研究使用的样本为 15 例临床黑色素瘤血液样本，用于评估 NRAS PASEA 检测法在检测患者 ctDNA Q61R/K/L 变体中的准确性和实用性 。
下面来看具体的研究结果：
- CRISPR - Cas 蛋白筛选及切割效率研究：研究人员对 AapCas12b、ScCas12b 和 FnCas12a 这三种 CRISPR - Cas 蛋白进行筛选。通过合成三种 75bp 的 DNA 片段，分别代表 NRAS 野生型、Q61R 和 Q61K 变体，来比较不同蛋白对这些片段的切割效率。结果发现，FnCas12a 对 NRAS 野生型的切割效率高于 ScCas12b 和 AapCas12b，且对 Q61R 和 Q61K 的切割效率较低。这表明 FnCas12a 在 NRAS 突变检测方面具有独特的优势。
- 检测灵敏度研究：NRAS PASEA 检测法展现出了极高的灵敏度。经过 30 分钟的 PASEA 处理，该方法能够检测到突变等位基因分数（MAF）低至 0.01% 的模拟 ctDNA 样本。在检测 NRAS Q61K 突变时，即使 PAM 位点 “TTN” 中的 “N” 位置核苷酸存在差异，基于 FnCas12a 的 NRAS PASEA 仍能准确识别。
- 临床样本检测研究：研究人员对 15 例黑色素瘤血液样本进行检测，其中 NRAS Q61R 突变有 4 例，NRAS Q61K 突变有 1 例。结果显示，NRAS PASEA 检测法准确识别出了所有携带 NRAS Q61R 和 Q61K 突变的患者（5/5），并且在 NRAS Q61 野生型患者中未出现假阳性结果。这一结果充分证明了该检测法在临床样本检测中的可靠性。
研究结论和讨论部分强调了 NRAS PASEA 检测法的重要意义。该检测法基于可编程核酸内切酶，利用 FnCas12a 对 PAM 序列（5′ - TTN - 3′）中 “TT” 的高特异性，能够精准识别 NRAS Q61 突变。检测灵敏度高达 0.01%，这意味着可以在早期检测到黑色素瘤患者血液中的突变 ctDNA，为黑色素瘤的早期诊断提供了有力的工具。而且，该检测法与肿瘤组织下一代测序（NGS）的一致性达到 100%，这对于黑色素瘤的伴随诊断、治疗效果动态评估以及疾病进展监测都具有重要价值。在一些难以进行影像学评估的区域，通过检测外周血样本中的 ctDNA 来诊断黑色素瘤，NRAS PASEA 检测法无疑为临床医生提供了一种全新的、有效的分析策略。它有望打破黑色素瘤诊疗的困境，为患者带来更多的生存希望，推动黑色素瘤精准诊疗领域的发展。
