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为解决 HLA-B58:01 等位基因检测难题，研究人员开发了完全集成的离心微流控平台，结合双链重组酶聚合酶扩增法（RPA）检测该等位基因。结果显示该平台检测限低、准确性高，为药物遗传学筛查提供新方向。
在医疗领域，精准用药越来越重要，而药物遗传学检测就是实现精准用药的关键一环。其中，检测 HLA-B
58:01 等位基因对于使用别嘌醇治疗高尿酸血症和痛风意义重大。别嘌醇是治疗高尿酸血症和痛风的一线降尿酸药物，但携带 HLA-B58:01 等位基因的患者使用别嘌醇时，可能会出现极其罕见却可能致命的别嘌醇超敏综合征（AHS） 。在汉族、日本人和泰国人群中，携带该等位基因的比例较高，最高可达 7.4%。所以，提前检测出这些高风险个体，能有效预防严重的皮肤不良反应，让患者能选择更安全的替代疗法。
目前，HLA-B58:01 等位基因检测的金标准是基于测序的分型（SBT）法，由国际组织相容性工作组推荐。虽然这种方法准确性高，可它非常耗费人力，需要专业设备，而且难以大规模用于常规检测。其他基于聚合酶链反应（PCR）的技术，像序列特异性引物（SSP）、序列特异性寡核苷酸（SSO）和实时 PCR 等，也用于 HLA-B58:01 分型检测。一些基于定量 PCR 的试剂盒，用熔解曲线或 TaqMan 探针检测，速度相对较快，可这些方法还是依赖昂贵的实验室设备，在资源有限的地方很难推广使用。
为了攻克这些难题，国内的研究人员展开了深入研究。他们开发出一种完全集成的便携式离心微流控平台，专门用于检测 HLA-B58:01 等位基因。这项研究成果意义非凡，它能直接从口腔拭子样本中快速检测出 HLA-B58:01 等位基因，整个检测过程只需要 50 分钟，大大缩短了检测时间，而且准确性极高，与金标准 SBT 法的检测结果 100% 相符，为药物遗传学筛查开辟了新方向，在资源有限的地区也能实现个性化医疗。该研究成果发表在《Biosensors and Bioelectronics》杂志上。
研究人员开展这项研究时，用到了几个关键技术方法。首先是重组酶聚合酶扩增（RPA）技术，它能在恒温条件下进行，不需要像 PCR 那样的昂贵热循环仪，特别适合即时检测（POC）。研究人员利用这种技术开发出双链 RPA 检测方法，能同时检测 HLA-B*58:01 等位基因和作为内对照的 β - 珠蛋白基因。其次是离心微流控技术，通过惯性力驱动流体在不同步骤间流动，实现了样本裂解、RPA 扩增和实时荧光检测等多个步骤的一体化，整个检测过程无需人工干预。研究使用的样本来自 12 名志愿者的口腔拭子。
开发用于 HLA-B*58:01 等位基因鉴定的双链 RPA
研究人员先用 4 名志愿者的纯化基因组 DNA 评估所选引物和探针的分析特异性，这些志愿者的 HLA-B 等位基因都经 SBT 法确认。结果显示，引物和探针特异性极佳，目标序列的双通道荧光曲线清晰，其他相关等位基因没有出现可检测到的非特异性扩增。而且，实验中加入多个内对照，进一步提高了检测的准确性，有效减少了假阴性结果。
离心微流控平台性能验证
研究人员用开发的离心微流控平台检测 12 名志愿者的口腔拭子样本。该平台能直接从样本中高效释放基因组 DNA，随后进行双链 RPA 扩增和实时荧光检测。结果表明，该平台能同时检测出 HLA-B*58:01 等位基因和内对照基因，检测限分别为 30 pg/μL 和 3 pg/μL ，检测结果与金标准 SBT 法完全一致，充分证明了平台的高特异性、可重复性和可靠性。
平台优势
与传统的 SBT 法相比，该离心微流控平台优势明显。它检测时间大幅缩短，从 SBT 法的最长 16 小时减少到 50 分钟，而且自动化程度高，极大减少了人工操作。同时，该平台集成了样本裂解和基因组 DNA 分析等功能，操作简单，无需复杂的样本预处理，在资源有限的环境下也能轻松开展检测。
研究人员成功开发出结合双链 RPA 检测的完全集成离心微流控平台，能在 50 分钟内直接从口腔拭子样本中可靠地检测出 HLA-B58:01 等位基因。通过对平台性能的多方面验证，证明其准确性、特异性和可重复性都很高，与金标准 SBT 法检测结果完全相符。这一成果对别嘌醇治疗意义重大，能有效避免携带 HLA-B58:01 等位基因的患者使用别嘌醇时出现严重不良反应。而且，该平台在药物遗传学筛查方面展现出巨大潜力，为个性化医疗提供了有力支持，尤其是在资源有限的地区，有望成为重要的检测手段，推动精准医疗的发展。
