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乙肝病毒（HBV）感染危害严重，HBeAg 是重要检测指标。研究人员制备抗 HBeAg 单克隆抗体（MAbs），优化 HBeAg 检测 ELISA。该检测方法敏感性 97.56%、特异性 99.40% ，有用于临床诊断的潜力，为 HBV 感染监测提供新途径。
在全球范围内，乙肝病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染如同一场挥之不去的阴霾，严重威胁着人类的健康。自 1986 年重组乙肝疫苗问世以来，虽然在防控 HBV 感染方面取得了一定成效，但它依然是一个沉重的全球健康负担。据世界卫生组织（WHO）报告，近 2.54 亿人饱受慢性 HBV 感染（Chronic Hepatitis B，CHB）的折磨，每年约 110 万人因此失去生命，多数死因与肝硬化和肝细胞癌相关。
HBV 基因组包含四个相互重叠的开放阅读框（Open Reading Frames，ORFs），其中前 C/C-ORF 编码乙肝 e 抗原（Hepatitis B e-antigen，HBeAg）和核心抗原（Hepatitis B core antigen，HBcAg）。HBeAg 作为一种可溶性分泌多肽，不仅在病毒复制过程中扮演着重要角色，还具有免疫调节功能，比如它能下调肝细胞中的 Toll 样受体（Toll-like receptor，TLR）家族，偏向激活非保护性 Th2 反应而非 Th1 反应，这一系列作用都促使病情向慢性化发展。在临床诊断中，HBeAg 是关键的血清学标志物，其在患者血清中的水平能反映病毒复制情况和肝炎的严重程度，HBeAg 血清学转换更是被视为治疗成功的标志，因此对 HBeAg 进行准确检测和定量分析意义重大。然而，在低收入和中等收入国家，高灵敏度和特异性的 HBeAg 检测方法十分有限，现有的商业检测试剂盒也存在一定的局限性，这就迫切需要开发更为有效的检测手段。
为了解决这一难题，来自德黑兰大学医学科学（Tehran University of Medical Sciences）的研究人员开展了深入研究。他们成功制备并鉴定了一系列针对 HBeAg 的单克隆抗体（Monoclonal Antibodies，MAbs）和多克隆抗体，还建立了一种具有较高特异性和敏感性的夹心酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA），用于检测 HBV 感染患者血清中的 HBeAg。这一研究成果发表在《Biologicals》杂志上，为 HBV 感染的临床监测和诊断提供了新的有力工具。
研究人员开展这项研究主要运用了以下关键技术方法：首先是血清样本采集，他们收集了 2022 年至 2024 年间的 220 份人类血清样本，包括 176 份 HBeAg 阴性健康血清和 44 份 HBeAg 阳性血清；接着进行细胞培养，使用 SP2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤细胞系；然后通过将免疫后的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，制备并筛选抗 HBeAg 的 MAbs；最后利用这些抗体设计并优化夹心 ELISA，并与商业 ELISA 试剂盒进行对比评估。
下面来看看具体的研究结果：
- 抗 HBe MAbs 的制备与筛选：研究人员用重组 HBeAg 免疫 BALB/c 小鼠，将小鼠骨髓瘤细胞系与免疫后的小鼠脾细胞融合，获得杂交瘤细胞。通过间接 ELISA 对杂交瘤细胞培养上清进行多次筛选，最终挑选出 6 种对重组 HBeAg 反应性最强的 MAbs，分别为 1F9、2E11、2C4、3F1、1C5 和 1G12。随后，经蛋白 G 亲和层析纯化腹水来源的 MAbs，并测定其同种型和对重组 HBeAg 的亲和常数（Ka），结果显示所有 MAbs 均为 IgG1 或 IgG2b 同种型，且含有 κ 轻链。
- 夹心 ELISA 的设计与优化：研究人员利用 HBeAg 特异性兔多克隆抗体和筛选出的小鼠单克隆抗体，设计并优化了一种夹心 ELISA。通过实验条件的优化，确定了该检测方法的最佳反应条件，为后续准确检测 HBeAg 奠定了基础。
- 检测方法的性能评估：使用优化后的夹心 ELISA 对 220 份血清样本进行检测，并与商业 HBeAg 检测 ELISA 试剂盒的检测结果进行对比。结果显示，两种检测方法具有显著的正相关性（r = 0.8250；P < 0.0001）。自制 ELISA 表现出良好的敏感性（97.56%）和特异性（99.40%），临界值为 0.193，曲线下面积为 0.9884 。此外，该检测方法重复性高，批内和批间变异系数分别为 2.46% 和 11.38%。
综合研究结论和讨论部分，这项研究意义非凡。研究人员成功制备并鉴定了抗 HBeAg 的 MAbs，建立的夹心 ELISA 具有良好的检测性能，为 HBV 感染患者血清中 HBeAg 的检测提供了一种可靠的方法。这一检测方法不仅可以用于监测 HBeAg 在 HBV 感染不同临床阶段的动态变化，帮助医生更准确地判断病情和制定治疗方案，而且在资源有限的地区，有望成为一种经济有效的 HBeAg 检测手段，为全球抗击 HBV 感染贡献力量。不过，该研究也存在一定的局限性，未来还需要进一步扩大样本量，开展更多的临床研究，以验证该检测方法在不同人群和临床环境中的有效性和可靠性。
