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为了解母乳寡糖（HMOs）在婴儿体内的利用情况，研究人员开展婴儿粪便中 HMOs 定量测定方法的研究。他们建立并验证了该方法，其精度和回收率良好。这有助于深入探究 HMOs 的作用，为婴儿健康研究提供有力支持。
在生命的最初阶段，母乳是婴儿最理想的食物，其中蕴含的母乳寡糖（Human Milk Oligosaccharides，HMOs）虽不能被婴儿直接消化吸收，却在婴儿的健康成长过程中扮演着至关重要的角色。HMOs 广泛存在于母乳和初乳中，浓度通常在 5 - 20g/L 之间，自 20 世纪初起就备受科研人员关注。它与婴儿的免疫发育、病原体防御、认知发展以及健康微生物组的构建紧密相关。然而，HMOs 大多会进入婴儿的大肠，被肠道微生物群利用，但不同婴儿的微生物群对 HMOs 的利用情况存在差异。
目前，虽然有不少关于 HMOs 在粪便中分析的报道，但定量检测方法却极为有限，已有的方法也大多未经严格验证。这使得科研人员难以准确了解 HMOs 在婴儿体内的代谢和利用过程，也限制了对婴儿健康与 HMOs 关系的深入研究。为了填补这一空白，来自意大利、荷兰和其他相关研究机构的研究人员展开了一项重要研究。
研究人员的努力取得了显著成果，他们成功建立并验证了一种用于测定婴儿粪便中 30 种寡糖的方法。这一成果意义非凡，它为深入研究 HMOs 在婴儿体内的命运提供了关键工具，有助于科研人员更好地理解 HMOs 对婴儿健康的影响机制，为开发更科学的婴儿喂养策略和营养产品奠定了坚实基础。该研究成果发表在《Analytical Biochemistry》上，为该领域的发展注入了新的活力。
在研究过程中，研究人员运用了多种关键技术方法。样本方面，他们使用了来自意大利和荷兰相关研究的 7 个匿名样本混合成实验室参考样本，以及来自波兰研究的低寡糖含量的匿名粪便样本。检测技术上，采用了液相色谱 - 荧光检测（UHPLC - FLD）法定量分析寡糖，同时运用液相色谱 - 荧光检测 - 质谱联用（UHPLC - FLD - MS）法进行定性分析和辅助鉴定。此外，还对方法进行了全面的验证，涵盖了峰识别、特异性、校准模型、方法准确性、精密度以及检测限和定量限等多个方面。
下面来详细看看研究结果。在选择性方面，研究人员在特定的色谱条件下，成功分离出 28 种 HMOs 以及内标物层粘连三糖，还能分离出牛奶乳清中已知的乳糖 - 3′ - 磷酸酯和婴儿配方奶粉中可能存在的麦芽寡糖等。不过，也检测到一些无法明确结构的未知信号，部分物质存在共洗脱现象，但可通过质谱进行区分。
线性响应方面，研究人员对 8 种 HMOs 进行了线性验证。结果显示，所有校准模型都呈现良好的线性关系，斜率相似，截距接近零，决定系数（r2）均大于 0.99，残差呈随机分布。这表明该方法在定量检测 HMOs 时，具有可靠的线性响应性能。
方法准确性上，通过在样本中添加 7 种 HMOs 进行回收实验来评估。结果表明，该方法的回收率在 86.6 - 115% 之间，符合美国食品药品监督管理局（FDA）的生物分析方法验证指南标准，说明该方法能够较为准确地测定粪便中 HMOs 的含量。
精密度评估方面，研究人员对加标样本和含有 23 种寡糖的样本进行多次检测。结果显示，重复性条件下的相对标准偏差（RSDr）均低于 5%，中间精密度条件下（RSDiR），寡糖浓度高于 200mg/100g 干粪便时，RSDiR不超过 8%；浓度在 15.8 - 200mg/100g 干粪便之间时，RSDiR低于 12%，同样符合 FDA 的相关指南要求，体现了该方法良好的精密度。
检测限（LoD）和定量限（LoQ）方面，研究人员对添加 8 种 HMOs 的低寡糖粪便样本进行检测。多数分析物的 LoD 在 1.0 - 3.1mg/100g 干粪便范围内，LoQ 在 3.8 - 10.0mg/100g 干粪便之间。对于受干扰的 LDFT 和 3FL，研究人员通过特殊方法确定了其 LoQ，分别为 70mg/100g 干粪便和 25mg/100g 干粪便，并认为 10.0mg/100g 干粪便可作为其他 HMOs 的通用 LoQ。
综合研究结论和讨论部分，该研究建立的方法适用于婴儿粪便中具有还原端寡糖的定量测定。这一方法的成功建立，不仅为研究天然或人工制造的 HMOs 在母乳或配方奶粉中的代谢命运提供了有力手段，还为进一步探究 HMOs 与婴儿健康之间的复杂关系开辟了新途径。同时，研究过程中发现的一些特殊现象，如粪便中出现未在母乳中常见的寡糖信号，也为后续研究提供了新的方向，有望推动该领域取得更多突破性进展，从而更好地保障婴儿的健康成长。
