鱼类血清免疫球蛋白（Ig）纯化用于血清学诊断的色谱法比较分析：优化策略与意义

为解决从鱼类血清中纯化免疫球蛋白（Ig）用于血清学诊断的问题，研究人员开展了对 4 种纯化技术（BSA 亲和色谱法、蛋白 A 亲和色谱法、蛋白 L 亲和色谱法、硫酸铵沉淀后离子交换色谱法）的研究。结果显示 BSA 亲和色谱法最有效，该研究为水产养殖血清学诊断奠定了方法学基础。

　　本研究展示了从两种鱼类（杜氏胡鲶Clarias dussumieri和斯氏非鲫 Etroplus suratensis）血清中纯化免疫球蛋白（Ig）的色谱技术。研究评估了 4 种纯化技术，包括牛血清白蛋白亲和色谱法（BSA-affinity chromatography）、蛋白 A 亲和色谱法（protein-A affinity chromatography）、蛋白 L 亲和色谱法（protein-L affinity chromatography）以及硫酸铵沉淀后离子交换色谱法（ammonium sulfate precipitation followed by ion-exchange chromatography）。随后，利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、凝胶色谱法（gel chromatography）和电喷雾电离纳升液相色谱 - 串联质谱（ESI-nano-LC-MS/MS）对纯化后的蛋白质进行分析。BSA 亲和色谱法是从这两种鱼类血清中纯化 Ig 的通用且高效的技术。尽管硫酸铵沉淀后离子交换色谱法成功分离了两种鱼类的血清 Ig，但 SDS-PAGE 分析显示存在非特异性蛋白条带，而蛋白 A 和蛋白 L 亲和色谱法纯化失败。纯化后的 Ig 呈现出独特的特征，杜氏胡鲶的 Ig 重链约 70kDa，轻链约 25kDa；斯氏非鲫的 Ig 重链约 72kDa，轻链约 28kDa 。凝胶过滤色谱法表明，杜氏胡鲶 Ig 的天然分子量约 803kDa，斯氏非鲫约 855kDa。通过 ESI-nano-LC-MS/MS 对重链条带的进一步表征证实其与 Ig 蛋白的同源性匹配。本研究完善了鱼类 Ig 纯化方案，为未来优化和拓展水产养殖血清学诊断中关键的方法学研究奠定了基础。