编辑推荐：
在炎症性肠病（IBD）研究中，B 细胞在疾病中的作用尚不明确。为探究该问题，研究人员对克罗恩病（CD）患者、健康对照及溃疡性结肠炎（UC）患者的 B 细胞受体（BCR）库进行深度测序。结果发现 CD 患者存在共享的 B 细胞克隆，这为 CD 的诊疗提供了新思路。
在人体的免疫系统中，B 细胞如同忠诚的卫士，守护着肠道的稳态。然而，在炎症性肠病（IBD）的世界里，B 细胞却像是迷失了方向的士兵，出现了失调的状况。IBD 主要包括溃疡性结肠炎（UC）和克罗恩病（CD），一直以来，人们普遍认为 IBD 是由异常的 T 细胞和先天免疫反应引起的，但越来越多的证据表明，抗体介导的免疫也在疾病的发病机制中扮演着重要角色。不过，B 细胞在其中究竟发挥着怎样的作用，是像导火索一样引发疾病，还是仅仅是黏膜屏障受损后的 “受害者”，这仍是一个未解之谜。
在这样的背景下，来自剑桥大学、斯坦福大学等多个研究机构的研究人员，踏上了探索 B 细胞在 CD 中奥秘的征程。他们的研究成果发表在《Nature Communications》上，为我们揭开了 CD 与 B 细胞之间神秘的面纱。
研究人员开展了一项综合性的研究，他们对四个队列的 CD 患者、健康对照以及 UC 患者的 B 细胞受体（BCR）库进行深度测序。BCR 就像是 B 细胞的 “身份标签”，每一个 B 细胞都有独特的 BCR，它能够识别特定的抗原。通过分析 BCR 库，研究人员希望能够找到 CD 患者中 B 细胞的独特特征，以及它们与疾病之间的关联。
研究人员用到的主要关键技术方法包括：首先是样本采集与处理，采集外周血、肠道黏膜、淋巴结等样本，如从参与者的外周静脉血中分离外周血单核细胞（PBMCs） ；其次是检测分析技术，运用流式细胞术对 B 细胞亚群进行免疫表型分析，通过测序技术对 B 细胞受体（BCR）库、RNA 进行测序，利用免疫分析方法检测血清中的免疫球蛋白水平和病原体抗体等；此外还运用了多种数据分析方法，如基因表达分析、克隆共享分析等。
研究结果如下：
- CD 患者 B 细胞的变化：通过对 CD 患者和健康对照（HC）外周血 B 细胞亚群的分析，发现 CD 患者浆母细胞增多，转换记忆 B 细胞减少。同时，对 CD19+IgD+CD27?（主要为初始 B 细胞）和 CD19+IgD?CD27+CD24+CD38?（主要为记忆 B 细胞）B 细胞进行批量基因表达分析，结果显示，与 HC 相比，CD 患者的这两类 B 细胞转录状态存在明显差异，涉及多个基因的上调和下调。而且，CD 患者的差异表达基因数量比 UC 患者更多，但二者也存在大量重叠的失调基因，表明 IBD 存在共同的异常 B 细胞转录特征。
- CD 中存在共同抗原的证据：研究人员通过分析 BCR 库中共享克隆的情况，发现虽然外周血中幼稚 B 细胞克隆共享较少，但在靠近炎症区域的淋巴结（LN）中，CD 患者的克隆共享现象明显。他们鉴定出 12108 个独特的克隆，这些克隆存在于至少两个 CD 患者中，且在对照的死后肠系膜淋巴结（MSLN）中不存在，并且在类别转换的同种型（如 IgG+、IgA+）中比例更高。此外，在 CD 患者的 PBMC 和浆母细胞中也验证了这些与 CD 相关的克隆，进一步表明 B 细胞对共享抗原的反应在 CD 患者中较为常见。
- 抗原驱动浆母细胞克隆扩增：为了确定外周血浆母细胞的增加是否由对共享抗原的反应驱动，研究人员对浆母细胞的 BCR 库进行分析。结果发现，与 CD 患者的 PBMC 相比，CD 相关克隆在浆母细胞中更为普遍，而在健康个体和 UC 患者的浆母细胞中则不常见。同时，还鉴定出 UC 患者浆母细胞中的共享克隆，但这些克隆在 CD 患者中并未富集，突出了 CD 和 UC 中 B 细胞抗原反应的差异。
- CD 相关克隆的亲和力成熟增加：在 IBD 患者中，循环浆母细胞的体细胞高频突变（SHM）整体减少，但 CD 相关克隆在所有同种型中的 SHM 增加，这表明 CD 相关克隆发生了亲和力成熟，进一步证明了抗原靶向免疫的存在。
- 血清抗体区分 CD 与 UC 和 HC：对血清中抗体的分析显示，CD 患者血清中针对肺炎克雷伯菌等病原体的抗体上调。通过稀疏偏最小二乘判别分析（sPLSDA），基于 20 种关键抗体群体可以很好地区分 CD 与 UC 和 HC，表明抗体在疾病中发挥着作用。
- 肠道 BCR 库分析：对肠道黏膜 BCR 库的研究发现，CD 患者肠道黏膜中 CD 相关克隆的富集程度高于 HC 或 UC 患者。而且，CD 相关克隆的 SHM 率增加，表明存在亲和力成熟。虽然疾病组之间的亚型使用没有显著差异，但 UC 和 CD 患者与非 IBD 对照相比，IGHV4 - 61 使用减少，IGHV1 - 8 使用增加。
研究结论和讨论部分表明，该研究首次证实了 CD 患者中存在共享的疾病特异性 B 细胞克隆，这些克隆存在于多个患者的淋巴结、肠道黏膜和 PBMC 中，但在健康对照和 UC 患者中不存在。虽然目前还不清楚这些克隆所针对的抗原特异性和抗体的中和能力，但它们的存在暗示了疾病相关抗原的存在，而不是 B 细胞的非特异性多克隆激活。此外，研究还发现了 CD 特异性的抗体谱，针对多种病原体的抗体在 CD 患者中上调。这些发现为 CD 的发病机制提供了新的见解，有助于未来开发更精准的诊断方法和治疗策略，如通过鉴定更多的抗原靶点，为疾病的诊断和治疗开辟新的道路，具有十分重要的意义。
