尿酸调控树突状细胞和 B 细胞，决定乳剂佐剂免疫原性的关键机制

为探究 SE 佐剂免疫原性的作用机制，韩国巴斯德研究所等机构的研究人员开展了以尿酸（UA）为关键靶点的研究。结果表明 UA 在 SE 佐剂诱导免疫反应中起关键作用，这有助于理解 SE 佐剂作用机制，为增强免疫提供新靶点。

　　在疫苗研发领域，免疫佐剂的作用至关重要。传统的基于病原体相关分子模式（PAMP）的佐剂已被广泛研究，但对于其作用机制仍未完全明晰。近年来，损伤相关分子模式（DAMP）途径成为新的研究热点。角鲨烯基乳剂（SE）佐剂如 MF59 和 AS03 被广泛应用于流感病毒和 SARS-CoV-2 等疫苗中，然而，其具体的作用机制，尤其是尿酸（UA）在其中的角色，尚未得到充分研究。为了解决这些问题，韩国巴斯德研究所（Institut Pasteur Korea）、圣保罗大学（University of S?o Paulo）、延世大学（Yonsei University）等机构的研究人员开展了相关研究。该研究成果发表在《npj Vaccines》杂志上，为理解 SE 佐剂的免疫机制提供了新的视角。

研究人员运用了多种关键技术方法。在动物实验方面，选用野生型（WT）C57BL/6（B6）、BALB/c、OT-I 和 OT-II 小鼠，在特定条件下饲养并按规范进行免疫操作。通过皮下注射不同抗原和添加剂，构建免疫模型。利用病毒攻毒实验，观察小鼠感染流感病毒后的体重变化和生存情况。在检测分析技术上，运用 DAMP 检测试剂盒测定相关分子水平；采用流式细胞术检测细胞表面蛋白和细胞内细胞因子；借助 RNA 测序及数据分析，探究基因表达变化和相关信号通路。

研究结果如下：

1. SE 佐剂诱导 DAMPs 和细胞因子释放：研究人员皮下注射 AV（一种与 MF59 类似的 SE 佐剂）后，发现 AV 显著增加了引流淋巴结（dLNs）中 ATP、dsDNA 和 UA 的局部浓度，其中 UA 变化最为明显。同时，AV 能诱导 dLNs 和血清中促炎细胞因子如 IL-6、MCP-1、IFN-γ、IL-27 和 TNF-α 等的快速增加。
2. 阻断 UA 消除 SE 佐剂介导的体液和细胞免疫：通过在体内使用 DAMP 阻断剂，研究发现抑制 UA 合成会显著损害 OVA 特异性 IgG 反应，减少生发中心（GC）B 细胞和滤泡辅助性 T（T_FH）细胞的形成，降低 CD4⁺T 细胞和 CD8⁺T 细胞的激活频率，表明 UA 在 SE 佐剂诱导的最佳抗体和 T 细胞反应中起着关键作用。
3. UA 促进 SE 诱导的先天免疫反应：抑制 UA 合成会使 AV 注射后局部和全身的 IL-6、IFN-γ、MCP-1 和 TNF-α 分泌显著减少，同时减弱树突状细胞（DCs）的激活，包括总 DCs、迁移性 DCs（mDCs）和驻留性 DCs（rDCs），说明 UA 在触发 SE 佐剂给药后 dLNs 中的先天免疫反应中具有重要作用。
4. 外源性添加 UA 显示佐剂效应：用 UA 晶体（MSU）补充蛋白质抗原 OVA，可诱导更高的抗体反应，增加 GC B 细胞和 T_FH细胞的频率，促进 CD4⁺T 细胞的激活，但对 CD8⁺T 细胞反应影响较小，表明 MSU 本身可有效增强抗原特异性抗体反应。
5. UA 直接靶向 DCs 并增强其功能：MSU 处理 DCs 后，DCs 表面的 MHC II、CD80 和 CD86 表达显著增加。RNA 测序分析显示，MSU 激活了 DCs 中的 TNF-α 信号通路、炎症反应通路等，促进了 DCs 的成熟、抗原加工呈递和迁移。与未处理的 DCs 相比，MSU 处理的 DCs 与 T 细胞共培养后，T 细胞增殖明显增加。
6. UA 直接刺激 B 细胞激活：MSU 处理 B 细胞后，B 细胞表面的 MHC II、CD69 和 CD86 表达增加。RNA 测序分析表明，MSU 激活了 B 细胞中的 IL-2 信号通路，促进了细胞增殖和浆细胞分化相关基因的表达，从而促进 B 细胞和抗体反应。
7. UA 对 SE 佐剂流感疫苗的保护性免疫至关重要：在流感疫苗实验中，MSU 补充剂增强了抗 HA IgG 反应和中和抗体的产生，提高了小鼠的存活率。而抑制 UA 则减弱了 AV 的保护作用，表明 UA 在流感疫苗的保护性免疫中起着关键作用。

研究结论和讨论部分指出，本研究证明了 UA 在含 SE 佐剂疫苗的最佳免疫原性中起着不可或缺的作用，它直接作用于 DCs 和 B 细胞，影响先天免疫反应、体液反应和 T 细胞反应。UA 的释放有助于形成免疫活性环境，促进 DCs 的成熟和激活，增强后续的免疫反应。同时，研究也发现了一些有趣的现象，如外源性 MSU 对 CD8⁺T 细胞激活作用有限，可能是由于其无法完全模拟 SE 佐剂产生的复杂免疫环境。此外，研究还对 UA 的细胞感知机制进行了探讨，提出 GPCR 可能是 MSU 的潜在受体。然而，本研究也存在一定的局限性，如未对细胞介导的保护作用进行实验验证。总体而言，该研究为理解 SE 佐剂的作用机制提供了重要依据，为开发基于 UA 的新型免疫增强策略奠定了基础。