《Nature Cancer》双重调控细胞毒性及检查点受体优化Delta One T细胞疗法在结直肠癌治疗中的疗效

针对结直肠癌(CRC)免疫治疗响应率低的难题，Rafael Blanco-Dominguez团队开发了基于Vδ1+γδ T细胞的Delta One T(DOT)疗法。研究发现肿瘤微环境会诱导DOT细胞表面TIGIT/PD1检查点受体失衡，通过联合NKG2D配体上调(丁酸盐处理)与双检查点阻断，显著增强DOT细胞对MMR-p/MSS和MMR-d/MSI CRC的杀伤效果，为实体瘤免疫治疗提供新策略。

　　

在癌症免疫治疗领域，结直肠癌(CRC)始终是块难啃的"硬骨头"。尽管免疫检查点抑制剂(ICB)在部分微卫星不稳定(MSI)型CRC中展现疗效，但占病例85%以上的微卫星稳定(MSS)型患者仍束手无策。这种困境主要源于肿瘤细胞通过下调MHC-I分子逃逸CD8⁺ T细胞监视，而传统αβ T细胞疗法又高度依赖HLA识别。近年来，γδ T细胞因其独特的HLA非依赖性杀伤机制备受关注，其中肠道富集的Vδ1⁺亚群更被发现在CRC患者中预示良好预后。然而如何将这类细胞转化为临床可用的疗法，仍是悬而未决的科学难题。

来自葡萄牙古尔本基安科学研究所的Bruno Silva-Santos团队长期致力于γδ T细胞疗法开发，其临床级产品Delta One T(DOT)细胞已在血液肿瘤中显示潜力。为突破实体瘤治疗瓶颈，研究团队将目光投向CRC这一具有天然组织趋向性的癌种。通过分析557例CRC队列，他们发现肿瘤浸润γδ T细胞数量与患者5年生存率正相关，尤其值得注意的是，在MSS亚型中这种关联比CD8⁺ T细胞或NK细胞更显著。这为DOT细胞治疗CRC提供了临床依据。

研究首先证实DOT细胞对CRC的广谱杀伤能力。体外实验显示，不论MMR状态如何，DOT细胞均能有效杀伤6种CRC细胞系、原代肿瘤样本及患者来源类器官(PDO)。在模拟临床环境的原位移植模型中，静脉输注的DOT细胞特异性归巢至盲肠肿瘤部位，显著抑制SW620细胞构建的肿瘤生长。这些数据首次证明Vδ1⁺γδ T细胞过继疗法对实体瘤的潜在价值。

深入分析却揭示令人担忧的现象：肿瘤浸润DOT细胞呈现"活化-耗竭"混合表型。与输注前相比，浸润细胞高表达抑制性受体TIGIT(升高3.5倍)和PD1(新增35%)，同时伴随关键激活受体NKG2D和DNAM1的下调。这种"刹车油门同时踩"的状态导致细胞毒性分子(颗粒酶B、穿孔素)分泌减少，与内源性Vδ1⁺肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的表型变化惊人一致。单细胞聚类分析将CRC患者TIL分为9个亚群，其中PD1⁺TIGIT⁺群体几乎仅存在于肿瘤组织，且共表达耗竭标志TIM3，提示这是TME诱导的普适性调控模式。

为破解这一困局，团队提出双管齐下的优化策略。一方面通过筛选微生物代谢物库，发现短链脂肪酸丁酸盐可显著上调CRC细胞表面NKG2D配体(MICA/B和ULBP1-6)。机制研究表明，丁酸盐处理使SW620细胞的ULBP2表达提升8倍，并通过CRISPR验证NKG2D是DOT细胞识别CRC的主要途径(KLRK1敲除使杀伤效率降低62%)。动物实验中，饮水补充丁酸盐使肿瘤NKG2D配体阳性率提高3倍，联合DOT治疗使小鼠生存期显著延长。

另一方面，研究揭示TIGIT与PD1的协同抑制作用。在IFNγ刺激下，CRC细胞同时上调PDL1和PVR(分别为PD1和TIGIT配体)，形成双重免疫逃逸。体外实验证明，仅当PVR与PDL1共刺激时，DOT细胞的细胞毒性分子才会显著减少，这种抑制可被双抗体阻断完全逆转。更重要的是，在体实验显示抗PD1(纳武利尤单抗)与抗TIGIT(维博利单抗)联用产生协同效应：治疗28天后，双阻断组肿瘤体积仅为对照组的1/5，且浸润DOT细胞的CD107a⁺比例提升2.3倍。

该研究通过创新性的"增强杀伤信号(NKG2D配体)+解除抑制信号(PD1/TIGIT)"双轨策略，成功克服了γδ T细胞在实体瘤微环境中的功能限制。特别值得关注的是，DOT细胞对MSS型CRC——这一当前免疫治疗"盲区"的有效杀伤，为占CRC绝大多数的MSS患者带来新希望。目前基于该成果的AML临床试验(NCT05886491)已开展，为后续CRC临床转化奠定基础。

从更广视角看，这项工作突破性地将菌群代谢调控(丁酸盐)、固有免疫识别(NKG2D)与适应性免疫检查点(PD1/TIGIT)三大前沿领域有机结合，为肿瘤免疫治疗提供全新范式。正如作者在讨论中指出，Vδ1⁺γδ T细胞在B2M突变CRC患者对ICB响应中的关键作用已被证实，本研究则进一步证明通过合理改造，这类细胞有望成为攻克"冷肿瘤"的利器。未来值得探索的方向包括：优化DOT细胞的体内持久性、开发通用型异体疗法、探索与其他免疫疗法(如CAR结构)的联合应用等。