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肺癌是全球癌症死亡的主要原因，非小细胞肺癌（NSCLC）中 ALK 重排患者对 ALK 酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）治疗会产生获得性耐药，其中可逆耐药机制不明。研究人员构建阿来替尼耐药的 EML4-ALK 突变肺癌细胞系研究发现，CCN1 可影响肿瘤细胞增殖、血管生成及阿来替尼敏感性，或为治疗靶点和耐药生物标志物。
在癌症的世界里，肺癌就像一个 “大反派”，是全球癌症死亡率最高的疾病之一。非小细胞肺癌（NSCLC）在肺癌中占比约 85%，其中 ALK 基因重排的患者不在少数。近二十年来，针对 ALK 重排的分子靶向治疗，就像给患者们点亮了一盏希望之灯，显著降低了 NSCLC 的死亡率。然而，耐药问题却如同一朵乌云，笼罩在治疗的道路上。在各种耐药现象中，有一种 “可逆耐药现象” 特别引人关注。有些患者在对靶向药物产生耐药后，停止用药一段时间，竟然又对药物重新敏感了。但这种现象背后的机制却像一团迷雾，很少有人能真正弄清楚。这就好比医生们拿着治疗的 “钥匙”，却找不到打开耐药这把 “锁” 的正确方法。所以，为了拨开这层迷雾，更好地治疗患者，研究这种可逆耐药现象就显得尤为重要。
中山大学肿瘤防治中心的研究人员勇敢地承担起了探索这一未知领域的重任。他们开展了一项针对 EML4-ALK 突变肺癌细胞对阿来替尼可逆耐药机制的研究。最终发现，CCN1 在这一过程中起着至关重要的作用，它或许能成为治疗这类肺癌的新靶点，也可能是一个潜在的耐药生物标志物。这一研究成果发表在了《Cell Death and Disease》杂志上。
为了开展这项研究，研究人员运用了多种关键技术方法。首先是细胞培养和构建可逆耐药细胞系，他们将人肺癌细胞系 H3122 用阿来替尼诱导出可逆耐药细胞系。接着进行全基因组测序（WGS）和 RNA 测序，以此来分析基因和转录组的变化。此外，还运用了实时定量 PCR（qPCR）、细胞活力和集落形成实验、蛋白质免疫印迹（Western blotting）等技术，从不同层面深入探究相关机制。
下面来看具体的研究结果。
高浓度阿来替尼诱导 EML4-ALK 突变肺腺癌细胞产生可逆耐药：研究人员用高浓度阿来替尼培养携带 EML4-ALK 融合的 H3122 细胞，使其产生耐药。全基因组测序发现，耐药细胞的基因改变大多没有导致氨基酸序列变化，也没有出现已知的耐药突变。而且，停药后细胞对阿来替尼的敏感性提高，这就证实了这种耐药是可逆的，并且不是由基因异常引起的。
RNA 测序发现 CCN1 随 ALK 抑制剂治疗变化而改变：通过药物假期 - 给药 - 假期实验循环，研究人员发现细胞对阿来替尼的敏感性会随着药物的停用和重新使用而变化，这再次确认了可逆耐药现象。对实验过程中不同时间点的细胞进行 RNA 测序和分析，发现 CCN1 基因在药物停用、重新使用和再次停用的过程中，其 RNA 和蛋白质水平都呈现出相应的变化趋势。
抑制 CCN1 可抑制肿瘤细胞增殖和血管生成，并增强对阿来替尼的敏感性：研究人员利用 RNA 干扰技术敲低 CCN1，结果发现 H3122 AR 细胞的集落形成能力和细胞生长活力都受到了抑制，血管生成能力也下降了，同时对阿来替尼的敏感性显著提高。用整合素靶向剂 SB273005 与阿来替尼联合治疗，也能增强细胞对阿来替尼的敏感性。
CCN1 通过 AKT-VEGFA 通路影响肿瘤细胞：通过 KEGG 通路分析和一系列实验，研究人员发现 CCN1 可以调节 AKT 的磷酸化水平，进而影响 VEGFA 的表达。敲低 CCN1 会使 AKT 磷酸化和 VEGFA 水平下降，而过表达 CCN1 则会使它们升高。此外，抑制 AKT 也会导致 VEGFA 水平下降，这表明 VEGFA 受 AKT 表达的调控。虽然过表达 CCN1 不会使细胞对阿来替尼产生耐药，但这也说明耐药机制很复杂，而 CCN1 可能是一个潜在的治疗靶点。
CCN1 在不稳定耐药细胞中被 NF-κB 激活：研究人员检测了多种蛋白质，发现 NF-κB 的磷酸化趋势与 CCN1 在药物假期 - 给药 - 假期实验期间的变化趋势一致。用 NF-κB 抑制剂咖啡酸苯乙酯（CAPE）处理 H3122 AR 细胞后，CCN1、AKT 磷酸化和 VEGFA 水平都下降了，而且细胞对阿来替尼的敏感性提高了。这表明 NF-κB 可能是 CCN1 的上游激活因子，抑制 NF-κB 表达或许能提高细胞对阿来替尼的敏感性。
研究结论和讨论部分再次强调，CCN1 在调节肺癌细胞对阿来替尼的可逆耐药状态中起着重要作用。抑制 NF-κB 或 CCN1 受体有可能提高患者对阿来替尼的敏感性，这为未来的联合治疗提供了有前景的靶点，值得进一步深入研究。虽然目前该研究还存在一些局限性，比如只研究了一种 ALK TKI，可逆耐药状态只在一种细胞系中得到验证等，但这一研究成果依然为肺癌的治疗开辟了新的方向，为后续研究奠定了坚实的基础，有望在未来帮助更多肺癌患者战胜疾病。**<
