CCR2 在乌苏图病毒脑炎中单核细胞招募和血脑屏障破坏的核心作用：为治疗开辟新方向

为解决 Usutu 病毒（USUV）感染脑部的免疫反应及控制疾病严重程度的问题，研究人员开展了 USUV 脑炎免疫反应的研究。结果表明 CCR2 介导单核细胞招募和血脑屏障（BBB）破坏，地塞米松可抑制炎症。研究成果发表在《Journal of Neuroinflammation》杂志上。这为治疗 USUV 脑炎提供了新方向。

　　

乌苏图病毒（Usutu virus，USUV）作为一种新兴的嗜神经黄病毒，近年来逐渐走进人们的视野。它能够在鸟类中引发大规模死亡事件，同时也威胁着人类和其他哺乳动物的健康。目前，USUV 和西尼罗河病毒（West Nile virus，WNV）在血清学上存在高度交叉反应，这使得诊断变得困难，许多 USUV 病例可能被误诊，从而低估了其传播的影响。更为棘手的是，针对 USUV 和 WNV，尚无获批的抗病毒药物和人类疫苗。在这样的背景下，深入研究 USUV 感染脑部后的免疫反应，探索控制疾病严重程度的策略迫在眉睫。

来自比利时鲁汶大学（KU Leuven）等研究机构的研究人员勇敢地迎接了这一挑战。他们通过一系列实验研究，得出了一系列关键结论，为我们理解 USUV 脑炎的发病机制和治疗提供了重要线索。该研究成果发表在《Journal of Neuroinflammation》杂志上。

在研究过程中，研究人员运用了多种关键技术方法。他们建立了免疫健全的小鼠感染模型，通过颅内接种 USUV 来模拟人体感染情况。利用流式细胞术（Flow cytometry）分析脑部白细胞的组成和变化，借助共聚焦活体显微镜（Confocal intravital microscopy，IVM）观察单核细胞在脑部的动态变化和血管完整性，还使用酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测细胞因子和趋化因子的水平，以此来深入探究 USUV 感染后的免疫反应机制。

研究结果如下：

• USUV 在脑部复制并致病：研究人员发现，通过颅内接种，USUV 能够在免疫健全的小鼠脑部有效复制。接种104 噬斑形成单位（Plaque forming units，PFU）USUV 的小鼠在感染 6 天后体重显著下降，出现典型的神经感染症状，部分小鼠甚至死亡，而接种热灭活 USUV 的小鼠则未出现这些症状。这表明 USUV 诱导的脑炎需要病毒在局部进行复制。

• USUV 感染诱导微胶质细胞激活和细胞因子释放：免疫染色结果显示，USUV 感染的小鼠脑部微胶质细胞显著激活，表现为 Iba1 染色面积增加，细胞形态变为阿米巴样。同时，脑部多种促炎细胞因子和趋化因子水平升高，如 IL-6、CCL5、CXCL1、CXCL10、CCL2 和 IFN-γ ，这表明 USUV 感染引发了强烈的脑部炎症反应。

• USUV 感染导致巨噬细胞免疫代谢激活：研究人员对骨髓来源的巨噬细胞（Bone marrow-derived macrophages，BMDM）进行研究，发现 USUV 感染可使 BMDM 的糖酵解速率、糖酵解能力和非糖酵解酸化显著增加，且这种变化与接种剂量相关。同时，感染后 BMDM 分泌的炎症趋化因子 CCL2 和 CCL5 也显著增加，这表明 USUV 感染是一种免疫代谢调节剂。

• 炎症单核细胞大量募集到 USUV 感染的脑部：通过流式细胞术和共聚焦活体显微镜观察，研究人员发现 USUV 感染后，脑部大量募集白细胞，其中炎症单核细胞（CD45hiLy6ChiCD11b+ ）是最主要的募集细胞类型。这些单核细胞在感染脑部被激活，其表面整合素 CD11b 的平均荧光强度增加。

• 单核细胞向脑部的募集依赖于 CCR2：CCR2 基因敲除小鼠实验表明，CCR2 在单核细胞和 T 细胞向脑部的募集中起着关键作用。CCR2 缺陷导致单核细胞和 T 细胞浸润显著减少，且单核细胞黏附能力受损，微胶质细胞激活程度也降低。此外，CCR2 缺陷小鼠的血脑屏障（Blood–brain barrier，BBB）破坏程度明显减轻，这表明 CCR2 在 USUV 诱导的 BBB 破坏中起着核心作用。

• IFN-γ 刺激脑部 CCL2 产生和炎症反应：IFN-γ 基因敲除小鼠实验显示，IFN-γ 在 USUV 感染后的脑部炎症反应中起着重要作用。IFN-γ 缺陷导致 CCL2 和其他促炎介质的产生减少，炎症单核细胞向脑部的迁移和微胶质细胞激活受到抑制，BBB 通透性降低，这表明 IFN-γ 驱动了 USUV 感染期间脑部炎症反应的全面发展。

• 地塞米松减轻脑部炎症和疾病严重程度：研究人员对多种抗炎药物进行评估，发现地塞米松能够显著降低脑部炎症，减少细胞因子产生、白细胞募集和微胶质细胞激活，减轻疾病症状和 BBB 破坏。虽然地塞米松治疗会导致病毒载量升高，但这表明脑部的炎症反应而非病毒载量是 USUV 诱导疾病负担的根源。

综合研究结论和讨论部分，这项研究具有重要意义。研究人员首次明确了 CCR2 在 USUV 脑炎中单核细胞招募和血脑屏障破坏过程中的核心作用，揭示了 IFN-γ 在驱动脑部炎症反应中的关键地位。此外，地塞米松治疗的有效性为 USUV 脑炎的治疗提供了新的思路，尽管使用类固醇治疗 WNV 脑炎的效果存在争议，但该研究为联合使用类固醇和抗病毒药物治疗 USUV 及其他黄病毒脑炎提供了理论依据，有望为未来的临床治疗开辟新方向，推动相关领域的进一步研究和发展。