过氧化物酶体 β- 氧化缺陷的小胶质 BV-2 细胞分析亚细胞分级：开启细胞功能研究新视角

《Histochemistry and Cell Biology》：Analytical subcellular fractionation of microglial BV-2 cells with peroxisomal beta-oxidation defect

为探究过氧化物酶体缺陷对细胞功能的影响，研究人员开发了经 CRISPR/Cas9 基因编辑，Acox1或Abcd1、Abcd2基因突变的 BV-2 小胶质细胞模型。结果显示，突变细胞颗粒度增加，过氧化物酶体在特定组分富集等。该研究为后续相关分析奠定基础。

　　过氧化物酶体（peroxisomes）在正常生理功能中的作用愈发受到关注，被视为关键参与者。为深入了解过氧化物酶体缺陷如何影响细胞功能，研究人员构建了经 CRISPR/Cas9 基因编辑，Acox1或Abcd1、Abcd2基因发生突变的 BV-2 小胶质细胞模型。生成的Acox1^?/? BV-2 细胞系缺失酰基辅酶 A 氧化酶 1（acyl-CoA oxidase 1），这是启动过氧化物酶体 β- 氧化（β-oxidation）的关键酶；而双突变体Abcd1/d2^?/? BV-2 细胞系则是编码膜 ABC 转运蛋白 ABCD1 和 ABCD2 的基因发生突变，这些转运蛋白负责将脂肪酰硫酯转运到过氧化物酶体内。此次研究首次运用分析分级法对比这三种基因型。通过流式细胞术发现，这些突变细胞的颗粒度增加，这可能与过氧化物酶体分布和线粒体动力学改变有关。此外，利用差速离心法对小胶质细胞中的细胞器标记进行分析，结果显示在这些 BV-2 细胞系模型的 L 和 P 组分中，过氧化物酶体尤为富集。使用等密度 Nycodenz 密度梯度离心法表明，过氧化物酶体的沉降中值密度为 1.18 g/ml。值得注意的是，研究结果显示，对比野生型（Wt）小胶质 BV-2 细胞和缺乏过氧化物酶体脂肪酸 β- 氧化的Acox1^?/?或Abcd1/d2^?/? BV-2 细胞，细胞器的分布情况并无显著差异。该研究首次报道了脑源性小胶质细胞的分级，为未来对过氧化物酶体组分进行蛋白质组学和 / 或代谢组学分析奠定了宝贵基础。