7-脱氮-7-氟-2′-C-甲基腺苷（DFA）：一种靶向黄病毒RNA聚合酶的广谱抗黄热病毒抑制剂

本文报道了7-脱氮-7-氟-2′-C-甲基腺苷（DFA）作为新型抗黄热病毒（YFV）抑制剂的突破性发现。该研究通过体外实验证实DFA对疫苗株（YFV-17D）和临床分离株（DakH1279）均具有亚微摩尔级抑制活性（EC50=0.9-5.5μM），并在A129/AG129小鼠模型中显著降低病毒载量（P=0.0004）和肝脏损伤标志物ALT水平（P<0.0001）。分子模拟揭示DFA通过2′-甲基修饰和E460卤键作用靶向高度保守的RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）活性中心，为开发首个广谱抗黄热病药物提供了理论依据。

　　

ABSTRACT
黄热病毒（YFV）是通过伊蚊传播的致命性黄病毒，在非洲和南美洲热带地区流行。目前尚无获批的抗YFV药物。研究发现7-脱氮-7-氟-2′-C-甲基腺苷（DFA）具有广谱抗黄病毒活性，包括登革热、日本脑炎、寨卡和丙型肝炎病毒。本研究旨在拓展DFA的抗病毒谱。

INTRODUCTION
YFV感染可导致高达50%的死亡率，近年南美疫情暴露出疫苗保护力下降的问题。团队此前通过核苷类似物筛选发现DFA和2-氟-2-溴尿苷（2-FBU）具有抗YFV潜力。DFA独特的7-氟修饰赋予其抗酶解特性，在多种黄病毒中显示0.07-3.7μM的EC₅₀值。

MATERIALS AND METHODS
采用Huh-7细胞、原代巨噬细胞（MDM）和3D肝球模型评估化合物毒性（CC₅₀>50μM）和抗病毒活性。通过ELISpot和qRT-PCR检测病毒滴度，建立A129（YFV-17DD）和AG129（临床株WT306）小鼠模型。肝脏功能通过ALT和吲哚菁绿（ICG）清除率评估。

RESULTS
毒性分析显示DFA在各类细胞中CC₅₀>24.6μM，线粒体毒性IC₅₀>50μM。抗YFV-17D活性在Huh-7（EC₅₀=0.9μM）和MDM（EC₅₀=0.5μM）中尤为显著。分子模拟揭示DFA二磷酸通过E460卤键和D667/D668-Mn²⁺配位结合RdRp活性中心（ΔG=-103.30kcal/mol）。

针对高致死性临床株DakH1279，DFA使感染性病毒滴度降低1.97log（98.9%）。小鼠实验中，10mg/kg DFA治疗使A129模型肝脏病毒载量显著降低（P=0.013），ALT水平下降（P<0.0001）；在AG129模型中更使临床株WT306的PFU/g降低3个数量级（P=0.0004），肝脏病理评分改善（P=0.0081）。

DISCUSSION
DFA的2′-甲基修饰阻碍链延伸，7-氟增强代谢稳定性。与sofosbuvir相比，DFA在治疗性给药时仍保持活性。值得注意的是，DFA在巨噬细胞中的高效抑制（EC₉₀=1.0μM）可能阻断病毒扩散。保守的RdRp结合模式支持其作为泛黄病毒抑制剂的潜力。

该研究首次证实DFA对临床YFV分离株的体内外活性，为开发针对黄热病及其他黄病毒感染（如寨卡、登革热）的广谱治疗策略奠定基础。未来需进一步优化给药方案并评估与其他抗病毒药物的协同作用。