Lipin1 介导塞利尼索抗多发性骨髓瘤新机制：开启精准治疗新篇章

为探究塞利尼索（SEL）治疗复发 / 难治性多发性骨髓瘤（RRMM）的作用机制及影响疗效的因素，研究人员运用 catTFRE 蛋白质组学技术开展研究。结果发现 SEL 通过 Lipin1 抑制 SREBPs 通路，下调脂质合成。这揭示了新机制，Lipin1 有望成为预测 SEL 疗效的生物标志物。

　　多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma，MM）是一种异质性血液恶性肿瘤，目前仍难以治愈。近年来，选择性核输出抑制剂（SINE）为复发 / 难治性多发性骨髓瘤（RRMM）的治疗带来了新希望，塞利尼索（Selinexor，SEL）作为第一代 SINE 化合物，已获批用于 RRMM 的治疗 。然而，SEL 的作用机制以及影响治疗反应的因素尚未完全明确，部分患者对其治疗反应不佳。因此，从临床角度出发，阐明 SEL 抑制骨髓瘤的机制并确定可预测治疗反应的生物标志物至关重要。

为了解决这些问题，上海交通大学医学院附属仁济医院和复旦大学等机构的研究人员开展了相关研究。研究成果发表在《Acta Pharmacologica Sinica》上，为多发性骨髓瘤的治疗提供了新的思路和方向。

研究人员运用了多种关键技术方法。在样本方面，收集了多发性骨髓瘤患者的骨髓样本。技术上，采用 catTFRE 蛋白质组学技术，该技术可从核提取物中富集转录因子（TFs）/ 辅因子（TCs），在蛋白质组水平上全面鉴定内源性 TFs/TCs；通过免疫荧光染色、亚细胞分级分离、蛋白质免疫印迹、共免疫沉淀等实验技术，深入探究相关分子的定位、表达及相互作用；利用慢病毒介导的 shRNA 干扰技术，敲低相关基因表达，验证基因功能；构建小鼠异种移植模型，在体内评估药物疗效及相关分子的作用。

下面来看具体的研究结果：

1. catTFRE 蛋白质组学分析揭示 SEL 诱导 MM 细胞中 TC 分子 Lipin1 的核积累：通过 catTFRE 蛋白质组学筛选，研究人员在每个样本中鉴定出 600 多个 TFs/TCs。SEL 处理后，MM 细胞的转录程序发生显著变化，近 170 个不同 TFs/TCs 的核丰度发生明显改变。其中，Lipin1 显著上调，且与 SREBP1/2 相互作用。通过通路富集分析发现，上调的 TFs/TCs 主要参与细胞应激反应、染色质重塑、代谢过程调节和细胞凋亡等生物学过程；下调的 TFs/TCs 与破骨细胞分化、DNA 损伤反应、MAPK 信号通路和脂肪生成等相关。研究人员推测靶向 SREBPs 依赖的脂肪生成途径对 SEL 的抗骨髓瘤疗效至关重要，且上调的 TCs 可能对 SREBPs 有抑制作用123。
2. Lipin1 受 XPO1 依赖的核输出调节，抑制 XPO1 可使其保留在细胞核内：免疫荧光染色和亚细胞分级分离实验证实，SEL 处理后，Lipin1 在 NCI-H929、MM.1S 细胞及原发性骨髓瘤细胞中均发生核积累。敲低 XPO1 表达可抑制细胞增殖，并导致 Lipin1 核积累，效果与 SEL 处理相似。通过生物信息学方法在 Lipin1 中鉴定出潜在的核输出信号（NESs），分子对接显示 XPO1 - RanGTP 与 Lipin1 具有高亲和力，共免疫沉淀实验进一步验证了 XPO1 与 Lipin1 的相互作用。这些结果表明 Lipin1 是 XPO1 的货物分子，抑制 XPO1 可使其保留在细胞核内456。
3. SEL 抑制 MM 细胞中 SREBPs 的转录活性并下调细胞内脂质水平：Western blotting 分析显示，SEL 处理后，NCI-H929 和 MM.1S 细胞中成熟形式的 SREBPs（mSREBPs）核水平显著降低。RT-qPCR 和 Western blotting 检测发现，SEL 处理后，MM 细胞系及原发性骨髓瘤细胞中 SREBP1 和 SREBP2 靶基因的 mRNA 和蛋白质表达均显著下调。细胞内脂肪酸和胆固醇含量检测表明，SEL 处理导致这两种代谢物水平显著降低。敲低 SREBF1 和 SREBF2 可抑制 MM 细胞增殖、促进细胞凋亡，并降低细胞内脂肪酸和胆固醇水平。这些结果表明 SEL 通过抑制 SREBPs 的转录活性，减少脂肪生成途径中关键酶的表达，降低细胞内脂质水平，发挥抗骨髓瘤作用789。
4. Lipin1 对 SEL 抑制 SREBPs 依赖的脂肪生成途径至关重要：Co-IP 实验证实了 Lipin1 与 mSREBPs 的相互作用，敲低 LPIN1 表达可消除这种相互作用。在敲低 LPIN1 的 MM 细胞中，SEL 对 SREBPs 转录程序的抑制作用减弱，SREBPs 下游靶基因的表达降低幅度减小，细胞内脂质水平的下调也被显著逆转。这表明 Lipin1 的核保留对 SEL 抑制 SREBPs 途径至关重要1011。
5. Lipin1 在体外和体内均有助于骨髓瘤细胞对 SEL 的敏感性：体外实验中，敲低 Lipin1 导致 NCI-H929 和 MM.1S 细胞对 SEL 的半数抑制浓度（IC₅₀）值增加约 2 - 2.5 倍，显著降低 SEL 诱导的细胞凋亡和 G₁期阻滞。体内实验中，建立 NOD-SCID 小鼠皮下骨髓瘤异种移植模型，结果显示敲低 Lipin1 的肿瘤在 SEL 治疗后体积和重量显著增大，免疫组化染色表明 Lipin1 缺失的肿瘤中 cleaved caspase-3 表达降低，Ki67 表达增加。这表明 Lipin1 在体外和体内均增强了骨髓瘤细胞对 SEL 的敏感性1213。

综合研究结果和讨论部分，该研究从全新角度阐明了 SEL 的抗肿瘤机制，即 SEL 抑制 XPO1，导致 Lipin1 核积累，Lipin1 作为转录辅因子抑制 SREBPs 的转录活性，减少脂肪生成途径中关键酶的表达，最终抑制骨髓瘤细胞的生长。这不仅为开发新的靶向联合治疗方案奠定了基础，还确定了 Lipin1 作为 SEL 敏感性的新型预测生物标志物，有助于推动多发性骨髓瘤的精准治疗，提高整体治疗效果。