Expression of BCL-2 and Laminin in Rectosigmoid Hirschsprung Disease: Insights into Disease Etiology and Associated Enterocolitis

为探究先天性巨结肠病（HD）及先天性巨结肠相关性结肠炎（HAEC）的病因，研究人员开展了关于 BCL-2 和层粘连蛋白（Laminin）在 HD 和 HAEC 中作用的研究。结果发现 BCL-2 和 Laminin 免疫组化可区分神经节和无神经节组织，且 HD 患者 BCL-2 mRNA 表达降低，还检测到 BCL-2 基因突变。该研究对 HD 和 HAEC 的病因研究有重要意义。

　　先天性巨结肠病（Hirschsprung disease，HD）是一种先天性疾病，其特征为远端胃肠道缺乏神经节细胞，导致肠道蠕动异常和功能性肠梗阻。而先天性巨结肠相关性结肠炎（Hirschsprung?associated enterocolitis，HAEC）是 HD 最严重且危及生命的并发症，但其病因至今仍不明确。在 HD 的胚胎发育过程中，神经分化和肠道微环境对神经前体细胞迁移至肠壁起着关键作用。BCL-2 蛋白作为抗凋亡蛋白家族成员，在神经元细胞分化和发育中至关重要；层粘连蛋白（Laminin）则是影响神经迁移的细胞外基质分子，对肠道神经元发育有促进作用。然而，目前 HD 的诊断和治疗主要集中在无神经节段，但部分患者术后仍存在胃肠运动功能障碍，这表明肠道的形态和功能异常可能并不局限于该段。为深入了解 HD 和 HAEC 的病因，来自 Bursa Uludag University 的研究人员开展了相关研究。
研究人员通过对 20 例直肠乙状结肠 HD 患者（其中 10 例术后发生 HAEC，10 例未发生）和 10 例对照患者的组织进行回顾性分析，运用了免疫组化、RealTime PCR 和 Sanger 测序等技术方法。免疫组化用于分析蛋白表达，RealTime PCR 测量 mRNA 水平，Sanger 测序检测 DNA 突变。样本来自 HD 患者手术切除的肠段以及因其他非 HD 相关疾病手术的对照患者肠段。
研究结果如下：

1. 患者基本信息与相关性分析：HD 组患者中位年龄 8 个月，对照组 50 个月。经 Spearman 相关性分析，BCL-2 和 Laminin（LAMA1）表达水平与年龄无显著关系，性别对其表达水平差异也无统计学意义。
2. 免疫组化研究结果：BCL-2 免疫组化显示，HD 患者无神经节组织中 BCL-2 表达较神经节组织降低（p≤0.001） ；Laminin 免疫组化表明，神经节组织中 Laminin 呈显著阳性染色，多数无神经节组织为阴性或轻度阳性（p<0.016）。
3. 基因研究结果：
   • mRNA 表达水平：HD 患者（包括 HAEC⁺和 HAEC^?）所有肠组织（G⁺和 G^?）中 BCL-2 mRNA 表达水平均显著低于对照组（p<0.0001）。HAEC⁺组 G⁺肠组织中 BCL-2 平均表达水平略低于 HAEC^?组，但无统计学差异。LAMA1 mRNA 表达水平在各组间无显著差异，HAEC⁺组 G⁺组织中 LAMA1 平均表达水平略低于 HAEC^?组。
   • DNA 突变分析：对所有患者进行 BCL-2 基因 DNA 突变分析，发现 20 例 HD 患者中有 3 例存在明显诱变变化，2 例可能存在诱变变化。其中 1 例 HD 患者 BCL-2 基因第 3 外显子 662 位碱基发生胸腺嘧啶到胞嘧啶（T>C）的新突变，导致氨基酸表达中 “亮氨酸” 转变为 “脯氨酸”。
     研究结论和讨论部分指出，BCL-2 和 Laminin 免疫组化可用于诊断 HD。HD 患者所有肠组织中 BCL-2 mRNA 表达低于预期，提示该问题可能影响整个肠道甚至其他器官。研究未发现 BCL-2 和 Laminin 表达差异与 HAEC 发展的统计学关系。部分 HD 患者 BCL-2 基因检测到诱变变化，其对临床的影响需进一步分析。该研究首次探讨 BCL-2 和 Laminin 表达变化与 HD 中肠炎发展的相关性，虽样本量有限，但为 HD 和 HAEC 的病因研究提供了新方向，对后续更大规模的研究具有重要参考价值，研究成果发表在《Pediatric Research》上。