揭秘甲癣罕见酵母病原体：分子鉴定与药敏特征研究及其意义

《BMC Research Notes》：Molecular identification and antifungal susceptibility profile of rare and emerging yeast species causing onychomycosis

为解决甲癣（onychomycosis）中罕见真菌难以鉴定及治疗的问题，研究人员开展了对引起甲癣的罕见酵母物种进行分子鉴定和评估其抗真菌药敏特征的研究。结果鉴定出 7 种罕见酵母物种，多数对氟康唑（fluconazole）MIC 值高。该研究对指导甲癣治疗意义重大。

　　甲癣，也就是我们常说的灰指甲，是一种让人头疼的指甲感染疾病。在生活中，很多人都深受其扰，不仅影响美观，还可能带来疼痛和不适。目前，甲癣主要由各种真菌引起，像皮肤癣菌、酵母菌和非皮肤癣菌霉菌等。近年来，一个新的问题出现了，由罕见真菌引起的甲癣病例在逐渐增多。这些罕见真菌用传统的鉴定方法很难准确识别，而且它们对抗真菌药物的敏感性和常见的酵母物种也不一样。这就给甲癣的治疗带来了很大挑战，医生们常常因为无法准确判断致病真菌，而难以选择合适的药物进行治疗，导致治疗效果不佳。

为了解决这些问题，来自伊朗设拉子医科大学等机构的研究人员开展了一项重要研究。他们的研究成果发表在《BMC Research Notes》上。这项研究旨在通过聚合酶链反应测序（PCR sequencing）来鉴定引起甲癣的罕见酵母物种，并确定它们的抗真菌药敏特征。

研究人员用到的主要关键技术方法有：首先是样本采集，从 2019 年 6 月至 2022 年 3 月，在伊朗设拉子 Dr. Kharazi 的医学真菌实验室，收集了 105 例甲癣患者的指甲标本。然后是 DNA 提取，将酵母分离株在 Sabouraud 葡萄糖琼脂（SDA）上培养后，用饱和醋酸锂沉淀法提取 DNA。最后通过 PCR 测序对酵母进行分子鉴定，扩增 rDNA 的 ITS1 - 5.8S - ITS2 区域，并与 GenBank 中的参考序列比对；采用肉汤微量稀释法，根据临床和实验室标准协会（CLSI）的 M27 - A3/S4 协议，测定多种抗真菌药物的最小抑菌浓度（MIC）。

下面来看看研究结果：

1. 酵母物种鉴定：研究人员成功鉴定出 19 株罕见和新兴酵母分离株，它们分属于 7 个物种。其中，近平滑念珠菌（Candida orthopsilosis）最多，有 9 株（占 47.36%），其他还有葡萄牙棒孢酵母（Clavispora lusitaniae）、近平滑威克汉姆酵母（Wickerhamiella pararugosa）、漫散纳加尼酵母（Naganishia diffluens）、异常威克汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）、法比安赛伯林德纳酵母（Cyberlindnera fabianii）和加勒比迈耶酵母（Meyerozyma caribbica） 。
2. 抗真菌药敏测试：多数罕见酵母对氟康唑表现出较高的 MIC 值。例如，所有近平滑念珠菌分离株对氟康唑（MIC≤2μg/ml）被归类为野生型；两株葡萄牙棒孢酵母菌株中，一株对氟康唑（MIC > 2μg/ml）为非野生型表型 ，但两株对伊曲康唑（itraconazole）（

在研究结论和讨论部分，研究发现甲癣中由罕见和新兴酵母菌株引起的感染发生率相对较高，在 105 株酵母分离株中有 19 株（占 18.09%）。传统方法难以准确鉴定这些罕见酵母，而 PCR 测序等分子方法能够准确鉴定酵母分离株的种类，这对于选择合适的治疗策略、防止指甲严重受损至关重要。同时，不同罕见真菌对抗真菌药物的敏感性不同，了解这些差异对于制定有效的治疗方案十分关键。这项研究强调了准确鉴定酵母物种和进行体外药敏测试的重要性，尤其是对于由罕见酵母引起的感染，为临床治疗甲癣提供了重要的参考依据，有助于提高甲癣的治疗效果，减少患者的痛苦。