编辑推荐:
为探究温度对 DREB2A 蛋白的直接影响,研究人员表达重组 DREB2A 并进行圆二色谱(CD)分析。结果表明,DREB2A 在 37°C 积累,23°C 不积累,且在 23°C - 37°C 间存在构象变化,这为研究植物热应激响应提供了新视角。
在全球气候变暖的大背景下,高温天气越来越频繁,这给植物的生长带来了极大挑战。植物为了适应这种环境变化,进化出了一系列复杂的应对机制,其中热应激响应至关重要。在这个过程中,转录因子发挥着关键作用,它们就像是细胞里的 “指挥官”,能够调控基因的表达,让植物做出相应的反应。而脱水响应元件结合蛋白 2A(DREB2A)就是众多转录因子中的一员,它在植物应对热应激和干旱胁迫时扮演着重要角色。
以往的研究已经发现,DREB2A 在植物应对热应激过程中起着核心作用。当植物处于正常温度(23°C)时,DREB2A 会迅速被降解;但在高温(37°C)环境下,它会积累起来,进而诱导相关基因表达,帮助植物抵御高温。不过,虽然科学家们对 DREB2A 的调控机制已经有了不少了解,比如知道在非应激条件下它会通过蛋白酶体系统快速降解 ,在热应激或脱水条件下会积累,还知道磷酸化和 SUMOylation 等修饰对其功能有影响,但温度究竟是如何直接作用于 DREB2A 蛋白本身的,这方面还存在很大的研究空白。为了填补这一空白,来自芬兰图尔库大学(University of Turku)的研究人员 Petri T?htinen 和 Hiroaki Fujii 开展了一项研究,他们的研究成果发表在《Acta Physiologiae Plantarum》杂志上。
研究人员采用了两种关键技术方法来开展研究。一是在大肠杆菌(E. coli)中表达重组 DREB2A 蛋白,通过这种方式可以在不同温度条件下观察蛋白的产生情况;二是利用圆二色谱(CD)光谱技术,该技术能够分析蛋白质的二级结构,从而检测在不同温度下 DREB2A 蛋白的结构变化。
研究结果主要有以下几个方面:
- 重组蛋白表达情况:研究人员将携带 GST - DREB2A 质粒的大肠杆菌分别在 37°C 培养 2 小时和 23°C 培养 14 小时。通过考马斯亮蓝染色的 SDS - PAGE 分析发现,在 37°C 培养的样本中出现了预期大小的 GST - DREB2A 诱导蛋白条带,而 23°C 培养的样本中则没有。这表明 GST - DREB2A 在 37°C 时能够积累,在 23°C 时则不能,这一结果与之前的研究报道相符。
- 蛋白构象变化:研究人员使用圆二色谱对纯化后的 GST - DREB2A 蛋白进行结构分析。结果显示,在 37°C 时,GST - DREB2A 在 221nm 附近出现一个负峰。随着温度降低到 23°C、14°C 和 4°C,209nm 处的信号进一步下降到更负值,而 221nm 处的信号则向更正值增加。而单独的 GST 蛋白则没有这种变化。这说明 GST - DREB2A 在 4°C 到 37°C 之间发生了逐渐的构象转变,尽管具体的变化细节还不清楚。
在研究结论和讨论部分,研究人员指出,虽然观察到的构象变化的生理意义还不明确,但有一种推测是大肠杆菌可能识别了 DREB2A 在较低温度下的构象,并将其作为降解目标。在拟南芥中,翻译后修饰会改变 DREB2A 的稳定性,而本研究中观察到的构象差异可能会调节翻译后修饰,从而使 DREB2A 在 37°C 时更稳定。不过,目前还缺乏在植物体内的直接实验证据。这项研究为进一步了解植物热应激响应机制提供了重要线索,也为后续研究开发可靠的全长 DREB2A 生产方案奠定了基础,对深入研究植物如何应对高温环境具有重要意义。