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在抗体偶联应用中，传统技术获取均质多聚偶联产物困难。研究人员开展 “ubi - tagging” 技术研究，该技术能快速高效生成多种偶联物，在双特异性 T 细胞衔接器及树突状细胞靶向抗原偶联等方面表现出色，为抗体工程提供了新方法。
在生物医学领域，抗体偶联物是众多诊断和治疗应用的基础。然而，传统的抗体偶联技术存在诸多问题。例如，基于赖氨酸或半胱氨酸残基的固有反应性进行偶联的策略，虽用于临床级抗体产品，但常导致产物异质性，难以控制修饰的数量和位点，还可能影响抗体功能和药代动力学。为解决这些难题，来自莱顿大学医学中心（Leiden University Medical Center）、拉德堡德大学医学中心（Radboud University Medical Center）等多个国外研究机构的研究人员展开了深入研究。
他们开发了一种名为 “ubi - tagging” 的模块化通用技术，该技术基于泛素（Ub）生物化学，实现了抗体的定点多价偶联。这一研究成果发表在《Nature Biomedical Engineering》上，为抗体工程领域带来了新的突破。
研究人员运用了多种关键技术方法。在构建相关蛋白时，利用 CRISPR/HDR 技术对杂交瘤细胞系进行基因编辑，以表达 ubi - tagged 抗体或抗体片段；通过固相肽合成法制备 Rho - Ub 和 Ub - 肽等；借助质谱分析对产物进行纯度和分子量等方面的检测。
研究结果如下：
- 位点特异性荧光标记：通过选择修饰单价 Fab’片段来表征 ubi - tagging 方法。实验表明，在特定的泛素化酶、供体和受体 ubi - tag 存在的情况下，30 分钟内即可完成偶联反应，形成预期分子量的荧光标记产物，且转换效率高达 93 - 96%。同时，ubi - tagging 不影响蛋白稳定性和抗原结合能力。
- 多价抗体形式：使用 ubi - tagging 方法评估多聚体抗体的生成。实验显示，该方法可使 Fab’片段高效形成多聚体，如形成高达 11 聚体及以上的产物。此外，还能可控地制备二价、三价抗体，且二价抗体的亲和力有所提高。
- mAb 偶联和四价抗体形式：研究发现 ubi - tagging 技术适用于 mAb 的偶联，能成功制备四价双特异性抗体共轭物。体外 T 细胞激活和细胞毒性实验表明，该共轭物具有功能性，可剂量依赖性地激活 T 细胞并杀伤靶细胞。
- Ubi - tagging 用于 DC 靶向抗原递送：将 ubi - tagging 与 sortagging 技术对比，发现 Fab - Ub2 - OVAp共轭物在体外和体内均能更有效地激活 T 细胞。通过放射性标记和生物分布实验，揭示了 ubi - tagged 共轭物在体内主要经肝脏清除，且能更特异性地被脾脏中的 DC 细胞摄取。
- 纳米抗体 ubi - tag 共轭物用于人类 DC 靶向抗原递送：研究人员探索了 ubi - tagging 在纳米抗体（VHHs）共轭物中的应用。实验证明，ubi - tagging 不影响纳米抗体的靶向结合能力，且能提高疏水性抗原肽的溶解度。同时，DC - SIGN 靶向的 VHH - Ub2 - gp100 共轭物可有效激活人 T 细胞。
研究结论和讨论部分指出，ubi - tagging 技术具有诸多优势。它能产生高度均一的产物，反应快速高效，可促进定义明确的多聚体抗体共轭物的生成，且能实现体内功能性抗原递送。不过，该技术也存在一定局限性，如 ubi - tag 相对较大，固相肽合成更复杂，反应依赖多种酶导致反应混合物更复杂。总体而言，ubi - tagging 技术为生成多种格式和组合的抗体共轭物提供了有效途径，有望广泛应用于蛋白质共轭物的研发，推动临床前研究及诊断和治疗应用的发展。
