工程化靶向CD5的CAR-NK细胞：突破T细胞恶性肿瘤治疗瓶颈的新策略

《Journal of Translational Medicine》：Engineering CD5-targeting CAR-NK cells from peripheral blood for the treatment of CD5-positive hematological malignancies

编辑推荐：针对CD5阳性血液肿瘤治疗中CAR-T细胞存在的自相残杀和T细胞耗竭难题，华中科技大学团队开发了基于外周血NK细胞的CD5-CAR-NK疗法，通过HSV-TK/GCV自杀开关系统实现安全可控，在体外和异种移植模型中展现出优于CAR-T和CAR-NK92的肿瘤清除能力，为"现货型"细胞治疗提供新选择。

　　在T细胞恶性肿瘤治疗领域，传统化疗和放疗效果有限，而新兴的CAR-T细胞疗法面临独特挑战。由于CD5抗原同时在正常T细胞和恶性T细胞表面表达，导致CAR-T细胞在制备过程中出现"自相残杀"（fratricide）现象，并可能引发长期免疫缺陷。更棘手的是，患者来源的T细胞常被肿瘤细胞污染，且免疫功能受损。这些因素严重限制了CD5靶向治疗的临床应用，亟需寻找替代方案。

华中科技大学同济医院血液科团队将目光投向了天然不表达CD5的自然杀伤细胞（NK）。这类先天免疫细胞不仅避免了自相残杀风险，还具有"即取即用"（off-the-shelf）的优势。研究人员设计了一种创新的CD5靶向CAR-NK细胞，整合了双重VH结构域增强靶向性、IL-15分泌维持细胞活性，以及疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）/更昔洛韦（GCV）自杀开关系统确保安全性。

研究采用多平台技术路线：从健康供体外周血分离NK细胞，通过m21-K562饲养细胞激活后，用狒狒包膜假型慢病毒转导CAR结构；构建包含CD8铰链区、4-1BB共刺激域和CD3ζ激活域的二代CAR；建立Jurkat细胞异种移植小鼠模型评估体内疗效；采用流式细胞术监测细胞表型变化；通过CD107a脱颗粒实验和细胞因子检测分析功能活性；利用生物发光成像定量肿瘤负荷。

研究结果揭示：1）在"工程化K562饲养细胞"部分，CAR-NK细胞展现42.51-54.68%的转导效率，IL-15分泌量与细胞密度正相关，且保持激活型受体（NKG2D、NKp30）上调的有利表型。2）"体外杀伤实验"显示，CAR-NK对Jurkat等CD5⁺细胞系的杀伤效率显著高于CAR-T和CAR-NK92（p<0.01），对6例患者原代白血病细胞的清除率达70-90%。3）"异种移植模型"证实，1×10⁷ CAR-NK细胞单次输注可使小鼠肿瘤信号降低10倍，肝脾浸润肿瘤细胞减少，且无体重减轻等毒性。4）"自杀开关验证"表明，10 μM GCV能在72小时内清除90%的HSV-TK⁺ CAR-NK细胞，有效控制对正常T细胞的误伤。

该研究突破性地证明：外周血来源CD5 CAR-NK细胞具有三重优势——避免自相残杀、保持强大肿瘤清除能力、实现精准安全控制。特别值得注意的是，相比临床常用的脐带血NK或NK92细胞系，外周血NK细胞展现更成熟的杀伤表型。自杀开关系统的引入则解决了靶向CD5治疗的核心安全隐患。这些发现为复发难治性T细胞白血病患者提供了可立即开展临床转化的方案，同时为其他共享抗原的肿瘤治疗提供了范式参考。未来研究需进一步优化IL-15分泌水平、评估长期免疫重建情况，并探索联合PD-1抑制剂等策略提升疗效。