鸡源抗白色念珠菌Als3蛋白单链抗体的开发与特性研究：一种新型抗真菌免疫治疗策略

针对日益严峻的白色念珠菌耐药性问题，台北医学大学团队通过鸡源免疫和噬菌体展示技术，成功开发出靶向毒力因子Als3蛋白的高亲和力单链抗体(scFv)。研究证实scFv能特异性识别内源性Als3，结合力达10-8 M水平，为抗真菌治疗提供了新型生物制剂候选。

　　

白色念珠菌(Candida albicans)作为医院获得性感染的主要病原体，正面临严峻的耐药挑战。随着唑类抗真菌药物的广泛使用，耐氟康唑菌株比例在过去二十年急剧上升，导致临床治疗失败率居高不下。更棘手的是，这种真菌通过形成生物膜(biofilm)获得高达1000倍的药物耐受性，其中Als3蛋白作为关键的毒力因子，不仅介导菌体粘附和生物膜形成，还能劫持宿主EGFR通路促进内化感染。面对传统抗真菌药物毒性大、耐药性强的困境，台北医学大学Yi-Yuan Yang团队在《Applied Microbiology and Biotechnology》发表的研究，为这一难题带来了突破性解决方案。

研究采用多技术联合作战策略：首先在鸡体内表达纯化重组Als3蛋白进行系统免疫，获得多克隆IgY抗体；随后通过噬菌体展示技术构建两个scFv抗体库（库容分别达5.3×10⁷和2.8×10⁷转化子），经四轮生物淘选后，利用ELISA和Western blot进行功能验证。特别值得注意的是，实验使用的临床分离株SC5314来自台湾卫生研究院的Hsiu-Jung Lo博士团队。

在"鸡免疫制备多克隆IgY"部分，SDS-PAGE和Western blot证实纯化的Als3蛋白具有预期分子量。免疫程序显示第六次免疫后抗体效价达1:64,000，较免疫前提升超200倍，为后续抗体开发奠定基础。"scFv抗体库构建与生物淘选"环节，长/短肽接头设计的两个文库经四轮筛选后，噬菌体滴度分别提升至10⁶和5×10⁵ CFU，ELISA信号增强证实特异性克隆富集成功。

关键的"scFv蛋白表达与结合活性分析"发现，13个随机克隆中有3个优势亚型：cAls3-S1(占短接头库76.9%)、cAls3-L1(占长接头库92.3%)和cAls3-L7。CDR3区突变率高达93%，证实其为抗原驱动产物。在"针对Als3蛋白的选定克隆分析"中，竞争ELISA测得cAls3-L1亲和力最高(K_d=1.5×10^-8 M)，比同类抗肺炎链球菌抗体强10倍。最令人振奋的是"针对白色念珠菌的结合实验"，Western blot和细胞ELISA证实这些scFv能识别内源性Als3，其中cAls3-L7在6.25 μg/mL浓度下仍保持OD>1.0的强结合力。

这项研究开创性地将禽源抗体技术与噬菌体展示相结合，突破哺乳动物抗体开发的传统范式。所获scFv抗体具有三大临床价值：其一，靶向毒力因子而非致死靶点，可减少选择压力延缓耐药；其二，小分子量(25-37 kDa)赋予其优越的组织穿透性；其三，通过抑制Als3介导的生物膜形成和铁摄取，可能逆转真菌的耐药表型。研究者特别指出，这些抗体可进一步改造为scFv-Fc融合蛋白，预计能使亲和力提升10倍以上。该成果不仅为侵袭性念珠菌病提供了新型治疗候选物，其技术路线更为其他难治性真菌感染提供了可复制的研发模板。未来研究将聚焦于抗体抑制生物膜的功能验证和快速诊断试剂开发，有望改变当前依赖血培养（灵敏度仅40%）的诊断困境。