基于脂多糖印迹聚合物直接进样的食品中沙门氏菌快速现场检测技术

【字体: 时间:2025年04月08日 来源:Journal of Nanobiotechnology 10.6

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  沙门氏菌(Salmonella)是主要食源性病原体,现有检测方法耗时且不适合现场应用。研究人员开发以脂多糖(LPS)为靶点的分子印迹聚合物(MIP)电化学传感器检测鼠伤寒沙门氏菌(S. typhimurium)。该传感器检测限为 10 CFU/mL,在 102 - 10? CFU/mL 呈线性响应,对实际食品检测有效,有助于食品安全监测。

  在食品安全领域,沙门氏菌(Salmonella)可谓是臭名昭著。它广泛存在于各类食品中,像禽肉、蛋类、乳制品以及水源里都能找到它的踪迹。一旦人们不小心摄入被沙门氏菌污染的食物,就可能患上沙门氏菌病,出现腹泻、发烧、腹痛等症状,尤其是儿童、老人和免疫力低下的人群,还可能引发严重的并发症,甚至威胁生命。
目前,检测沙门氏菌的传统方法,如培养平板法、酶联免疫吸附测定(ELISA)和聚合酶链反应(PCR)等,虽然准确性高,但是十分耗时,还必须在实验室中进行,这对于需要快速得出检测结果的食品加工和处理场所来说,根本无法满足需求。因此,开发一种快速、灵敏又能在现场使用的检测方法迫在眉睫。

韩国汉阳大学(Hanyang University)的研究人员勇挑重担,开展了一项极具意义的研究。他们以鼠伤寒沙门氏菌(S. typhimurium)为研究对象,致力于开发一种基于分子印迹聚合物(MIP)的电化学传感器。研究结果令人振奋,该传感器展现出了超高的灵敏度和选择性,检测限低至 10 CFU/mL,在 102 - 10? CFU/mL 的浓度范围内呈现良好的线性响应。更重要的是,它在实际食品样本,比如自来水、牛奶和猪肉的检测中表现出色,无需复杂的预处理就能直接检测。这一研究成果发表在《Journal of Nanobiotechnology》上,为食品安全监测提供了新的有力工具,有望预防食源性疾病的爆发,保障人们的饮食健康。

研究人员在研究过程中运用了多种关键技术方法。首先,通过化学合成的方式制备了以多聚多巴胺(PDA)为基质的分子印迹聚合物,在合成过程中精确控制各个反应步骤和条件,确保聚合物的质量和性能。然后,利用场发射扫描电子显微镜(FE - SEM)、透射电子显微镜(TEM)等微观表征技术,对聚合物的形貌和结构进行分析。最后,采用电化学测量技术,如差分脉冲伏安法(DPV)和循环伏安法(CV),来检测传感器对鼠伤寒沙门氏菌脂多糖(LPS)和菌体的响应性能。

MIP 的表征


研究人员对制备的 MIP 进行了全面的表征。从结构上看,通过在 PDA 纳米颗粒表面引入 4 - 甲酰基苯硼酸(FPBA),成功构建了能识别 LPS 的 MIP,洗脱 LPS 后形成了特异性结合位点。利用 TEM 和能量色散 X 射线光谱(EDS)分析发现,添加 FPBA 和形成 PDA 壳后,原子组成发生变化,证明了硼酸和 PDA 壳的成功形成。傅里叶变换红外光谱(FT - IR)和 X 射线光电子能谱(XPS)分析进一步验证了功能基团的变化以及硼酸和多巴胺均匀地掺入 MIP 中。通过动态光散射(DLS)优化印迹时间,确定 45 分钟的印迹时间能使 MIP 具有最佳的再结合性能。

MIP 传感器检测 LPS 的性能


研究人员构建了以单壁碳纳米管(CNT)为工作电极、碳为对电极、Ag/AgCl 为参比电极的传感平台。将 MIP 修饰在工作电极上后,通过 CV 和 DPV 检测其对 LPS 的响应。CV 结果显示,LPS 与 MIP 结合后,氧化还原电流峰显著降低,表明电阻增加。DPV 结果表明,随着 LPS 浓度增加,0.11 - 0.12V 处的峰电流减小,且在 0.1 - 100 μg 的 LPS 浓度范围内,峰电流与对数浓度呈现良好的线性关系(R2 > 0.999)。同时,MIP 对 100 μg LPS 的电流变化明显高于非印迹聚合物(NIP),且该传感器具有高的重现性和可重复性。

MIP 传感器检测沙门氏菌的性能


用 MIP 孵育鼠伤寒沙门氏菌后进行 SEM 观察,发现细菌细胞或其残余被 MIP 包围。定量检测结果显示,随着细菌浓度增加,0.11 - 0.12V 处的峰电流逐渐降低,在 102 - 10? CFU/mL 范围内,对数浓度与峰电流呈现强线性相关(R2 = 0.997),检测限为 10 CFU/mL。MIP 对鼠伤寒沙门氏菌的电流响应与 NIP 有显著差异,表明 MIP 对鼠伤寒沙门氏菌具有高度特异性。该传感器对革兰氏阳性菌和其他革兰氏阴性菌无明显响应,展现出良好的选择性,且对鼠伤寒沙门氏菌检测的重现性和可重复性良好,与传统培养方法相关性高。

MIP 传感器在食品基质中检测沙门氏菌的性能


研究人员以自来水、牛奶和猪肉为测试基质,评估传感器在实际食品样本中的性能。结果发现,即使不进行预处理,传感器对不同浓度的鼠伤寒沙门氏菌仍呈现浓度依赖性响应。虽然样本中的干扰分子会导致基线漂移,但响应电流的下降程度在不同浓度下保持一致,且不同食品样本的线性回归曲线斜率相同,R2 分别为 0.80、0.90 和 0.87 。

综上所述,研究人员成功开发了针对鼠伤寒沙门氏菌 LPS 的 MIP 传感器。与全菌印迹相比,LPS 印迹具有诸多优势,如特异性更高、操作更简单安全、模板稳定性和重现性好等。该传感器对鼠伤寒沙门氏菌 LPS 和全菌细胞均具有高分析性能,但检测时间约 30 分钟,未来可通过更换磁性核心等方式改进。总体而言,该研究成果在食源性病原体的现场检测方面潜力巨大,为保障食品安全提供了新的技术手段,有望在实际应用中发挥重要作用,预防食源性疾病的大规模爆发。
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