12 年追踪：德国卓越中心揭示唑类耐药烟曲霉药敏趋势及突变特征

《Mycopathologia》：Trends of Azole-Resistant Aspergillus Fumigatus Susceptibility Over 12 Years from a German ECMM Excellence Center

为解决唑类耐药烟曲霉（ARAf）感染治疗难题，德国医学真菌卓越中心（ECMM）研究人员开展 12 年 ARAf 对 5 种抗真菌药物药敏趋势研究。结果显示，部分药物药敏稳定，突变类型改变，新型抗真菌药活性良好，为临床治疗提供参考。

　　在医学领域，真菌感染一直是个棘手的问题，尤其是烟曲霉（Aspergillus fumigatus）引发的感染。烟曲霉是导致曲霉病的主要病原体，在免疫功能低下人群中，其感染率不断攀升，而唑类耐药烟曲霉（ARAf）的出现更是让治疗雪上加霜。自上世纪 90 年代发现唑类耐药现象以来，其在全球范围内的发生率持续上升，部分医疗中心的耐药率甚至超过 10%。这使得选择合适的治疗方案变得极为困难，患者的死亡率也居高不下。

为了应对这一挑战，德国杜伊斯堡 - 埃森大学医院医学真菌卓越中心（ECMM）的研究人员 Hedda Luise Verhasselt、Lara Thissen 等开展了一项长期研究。他们对 2011 年至 2022 年间收集的 143 株 ARAf 临床分离株进行分析，评估其对 5 种抗真菌药物 —— 两性霉素 B（AMB）、伊曲康唑（ITR）、伏立康唑（VCZ）、奥洛菲姆（OLO）和马诺吉匹（MGX）的药敏趋势，并探究相关突变与最低抑菌浓度（MIC）之间的关系 。该研究成果发表在《Mycopathologia》上，为临床治疗 ARAf 感染提供了重要依据。

在研究方法上，研究人员主要运用了以下关键技术：

1. 菌株收集：从德国埃森大学医院收集 143 株临床 ARAf 菌株，这些菌株均在含 4mg/L 伊曲康唑的沙氏葡萄糖琼脂上生长，且经 MIC 梯度试验证实伊曲康唑和伏立康唑的最低抑菌浓度 > 1mg/L。
2. 肉汤微量稀释法（BMD）：依据欧洲抗菌药物敏感性试验委员会（EUCAST）的推荐，测定抗真菌药物对分生孢子形成霉菌的肉汤稀释最低抑菌浓度。针对不同药物设置相应浓度范围，如 AMB、ITR 和 VCZ 为 0.016 - 8mg/L，OLO 为 0.001 - 0.5mg/L，MGX 为 0.004 - 2mg/L 。
3. 基因突变检测：采用商业多重实时 PCR（AsperGenius? 1.0）检测 cyp51A 基因的常见突变，如 TR₃₄/L98H 和 TR₄₆Y121F/T289A。对于未检测到这些突变的菌株，使用特定引物对扩增 cyp51A 基因并进行测序分析 。

下面来看具体的研究结果：

1. 抗真菌药物活性：研究发现，MGX 和 OLO 对大多数 ARAf 菌株表现出较低的 MIC/MEC，显示出良好的体外活性。相比之下，AMB、ITR 和 VCZ 的耐药率较高，分别有 1.4%、92.3% 和 97.9% 的菌株对其耐药。
2. 唑类药物 MIC 比较：对比 2011 - 2019 年和 2020 - 2022 年分离株的唑类 MIC，ITR 和 VCZ 的 MIC 几何均值虽有增加趋势，但差异无统计学意义。
3. 突变类型及分布：分子检测显示，86% 的 ARAf 菌株存在 TR₃₄/L98H 突变，7% 存在 TR₄₆Y121F/T289A 突变，7% 存在其他 cyp51A 相关点突变。并且，2016 年后，携带 TR₄₆/Y121F/T289A 和其他 Cyp51A 突变的菌株比例有所增加。
4. 突变与药物活性关系：不同突变类型对药物活性影响不同。VCZ 对携带 TR₄₆Y121F/T289A 突变的菌株 MIC 最高，ITR 对携带 TR₃₄/L98H 突变的菌株 MIC 较高。而 MGX 和 OLO 对不同突变菌株的活性无显著差异。

综合研究结果与讨论部分，该研究意义重大。一方面，明确了新型抗真菌药物 MGX 和 OLO 对 ARAf 菌株具有良好活性，且不受突变类型影响，为临床治疗提供了新的选择。另一方面，发现德国西部 ARAf 菌株中唑类药物的 MIC 在 12 年间相对稳定，但突变类型发生变化，这有助于临床医生根据突变类型更精准地选择治疗药物，同时也为后续深入研究 ARAf 的耐药机制和传播途径奠定了基础，对改善患者预后、降低死亡率具有重要的临床指导价值。