225Ac 标记的抗 HER2 抗体偶联物：开启肿瘤精准治疗新征程

《EJNMMI Radiopharmacy and Chemistry》：In vitro and in vivo evaluation of anti-HER2 antibody conjugates labelled with 225Ac

为解决 HER2 阳性肿瘤治疗难题，研究人员开展 “225Ac 标记的抗 HER2 抗体偶联物体内外评估” 研究。制备并优化了相关偶联物，发现225Ac - DOTA - pertuzumab 在 HER2+肿瘤中摄取高，在 HER2 - 肿瘤和健康组织中摄取低，为肿瘤治疗提供了新方向。

　　在癌症治疗领域，人类表皮生长因子受体 2（HER2）如同一个 “麻烦制造者”。正常情况下，HER2 在细胞生长中发挥着积极作用，然而一旦它过度表达，就如同脱缰的野马，会促使癌细胞疯狂增殖。在多种癌症中，都能看到 HER2 过度表达的身影，比如高达 20% 的乳腺癌病例被归类为 HER2 阳性（HER2⁺），此外，胃癌、卵巢癌等多种癌症也受其影响。HER2⁺肿瘤对化疗反应不佳，是癌症治疗中的一大难题。

目前，针对 HER2⁺癌症的治疗，免疫疗法成为首选，其中曲妥珠单抗（Trastuzumab）和帕妥珠单抗（Pertuzumab）这两种单克隆抗体发挥着重要作用。但随着治疗的推进，耐药问题逐渐凸显，患者对治疗的反应越来越差。因此，寻找更有效的治疗方法迫在眉睫。

在这样的背景下，捷克技术大学、帕拉茨基大学等研究机构的研究人员开展了一项具有重要意义的研究。他们致力于探究²²⁵Ac 标记的抗 HER2 抗体偶联物在肿瘤治疗中的应用，相关研究成果发表在《EJNMMI Radiopharmacy and Chemistry》杂志上。

研究人员采用了多种关键技术方法。在制备偶联物时，将曲妥珠单抗或帕妥珠单抗与双功能螯合剂 DOTA - NHS 在特定条件下反应，随后进行纯化和鉴定。对于放射性标记，在不同条件下用²²⁵Ac 对制备好的偶联物进行标记，并通过薄层层析（TLC）等方法测定标记产率和稳定性。细胞实验方面，选用 HER2 过表达的 SKOV - 3 细胞和低 HER2 表达的 MDA - MB - 231 细胞，进行结合特异性和亲和力检测。动物实验则选取正常小鼠和肿瘤异种移植小鼠，开展²²⁵Ac - DOTA - pertuzumab 的体内生物分布研究。

研究结果如下：

1. 合成、放射性标记及体外稳定性：成功制备出三种 HER2 靶向单克隆抗体的 DOTA 偶联物，通过实验优化了制备和放射性标记过程。结果显示，含有 6 个 DOTA 分子的偶联物（TD1 和 PD2）标记产率较高，且制备的放射性偶联物在体外具有高稳定性，在胎牛血清（FBS）和磷酸盐缓冲盐水（PBS）中，4°C 储存 10 天，放射化学纯度均不低于 95%；室温储存时，放射化学纯度也不低于 90%。
2. 结合特异性和亲和力：²²⁵Ac - TD1 和²²⁵Ac - PD2 这两种放射性偶联物对 SKOV - 3 细胞上的 HER2 受体表现出高结合特异性，在被冷抗体阻断后，结合显著减少。同时，它们与低 HER2 表达的 MDA - MB - 231 细胞结合极少。通过饱和实验测定，²²⁵Ac - PD2 对 HER2 受体的结合亲和力更高，其解离常数 K_D为 2.4 ± 0.2 nM，而²²⁵Ac - TD1 的 K_D为 9 ± 3 nM。
3. 体内生物分布研究：在正常小鼠体内，²²⁵Ac - DOTA - pertuzumab 在血液中的活性随时间下降，在高度灌注器官如肺、心脏、肾脏和肝脏中摄取较高，脾脏中的摄取逐渐增加。在肿瘤异种移植小鼠体内，血液中活性呈指数下降，HER2⁺的 SKOV - 3 肿瘤中摄取持续较高，可达 50 ± 14% ID/g，而 HER2 ^- 的 MDA - MB - 231 肿瘤中摄取与健康组织相当，仅为 5.0 ± 1.7% ID/g。

研究结论和讨论部分表明，该研究成功优化了 HER2 靶向抗体与²²⁵Ac 的制备和放射性标记过程，首次制备并评估了²²⁵Ac - DOTA - pertuzumab。两种测试抗体的放射性偶联物在稳定性和 HER2 受体亲和力方面表现出色。初步的体内研究显示，²²⁵Ac - DOTA - pertuzumab 有望成为进一步详细体内研究的候选药物。然而，研究中也发现了一些问题，如脾脏摄取的差异受多种因素影响，难以准确评估肿瘤 - 脾脏相互作用。尽管如此，这项研究为 HER2⁺肿瘤的治疗开辟了新的道路，为后续的临床研究奠定了坚实基础，有望推动肿瘤治疗领域的进一步发展。