PD-1 抑制：开启 HIV 治疗新征程，激活免疫并攻克潜伏病毒

《European Journal of Medical Research》：PD-1 suppression enhances HIV reactivation and T-cell immunity via MAPK/NF-κB signaling

为探究 PD-1 在 HIV 感染中作用及机制，研究人员开展 PD-1 抑制对 HIV 感染和 T 细胞功能影响的研究。结果发现 PD-1 抑制可恢复 T 细胞功能、激活潜伏 HIV。这为 HIV 治疗提供新策略，有望改善患者免疫功能。

　　在全球范围内，艾滋病（AIDS）就像一个可怕的 “恶魔”，严重威胁着人类的健康。人类免疫缺陷病毒（HIV）感染是导致艾滋病的元凶，它专门攻击人体的免疫系统，尤其是 CD4⁺ T 淋巴细胞。世界卫生组织（WHO）数据显示，全球约有 3800 万人感染 HIV，每年因艾滋病相关疾病死亡的人数高达数十万。尽管抗逆转录病毒疗法（ART）能抑制病毒复制，提高患者生活质量，但许多患者治疗后免疫功能仍无法完全恢复。同时，HIV 感染 T 细胞中 MAPK/NF-κB 信号通路的激活机制也未完全明晰。

在这样的背景下，哈尔滨医科大学附属第四医院和附属第二医院的研究人员展开了深入研究，其成果发表在《European Journal of Medical Research》上。

研究人员采用了多种技术方法。他们从 HIV 感染患者和健康对照者中分离外周血单个核细胞（PBMCs），运用流式细胞术分析 T 细胞亚群的 PD-1 表达；利用 ELISA 检测细胞培养上清液中细胞因子分泌水平；通过蛋白质免疫印迹（Western blot）和免疫共沉淀（Co-IP）分析 MAPK/NF-κB 信号通路；使用 J-Lat 细胞系作为潜伏 HIV 感染的体外模型，借助 GFP 荧光检测 HIV-1 LTR 的激活情况；还通过逆转染色质免疫沉淀（Reverse-ChIP）探索 HIV-1 Nef 蛋白与 PD-1 启动子的相互作用 。

下面来看具体的研究结果。

1. PD-1、HIV 感染与 T 细胞功能的关系：ART 治疗组中 CD3⁺、CD4⁺、CD3⁺、CD8⁺细胞数量显著增加。HIV 感染组和 ART 治疗组的 PD-1 基因表达较健康对照组明显升高，但 ART 治疗组和未治疗组的 PD-1 表达无显著差异。ART 治疗能显著降低早期细胞凋亡，增加 CD3⁺和 CD4⁺细胞数量。HIV 感染患者的 TNF-α、IL-2、穿孔素和颗粒酶 B 水平较健康对照组显著降低，PD-1 高表达组的 IFN-γ 水平也明显降低，这表明 PD-1 表达与 T 细胞免疫功能相关。
2. PD-1 对 MAPK/NF-κB 通路的调节：与健康对照组相比，HIV 感染组、PD-1 低表达组、PD-1 高表达组和 ART 治疗组中 pMEK1/2、p-p38 MAPK 和 p-NF-κB p65 的表达水平显著升高，说明 PD-1 通过调节 MAPK/NF-κB 信号通路促进 HIV 免疫逃逸。
3. PD-1 抑制激活潜伏 HIV：用派姆单抗（pembrolizumab）和阿帕他胺（Apabetalone）单独或联合处理 J-Lat 细胞，与空白对照组相比，处理组的 HIV-1 LTR 基因表达显著增加，GFP 荧光检测也证实了处理组的荧光增强，表明 PD-1 抑制可以激活潜伏 HIV。
4. PD-1 抑制对 HIV 感染 T 细胞的影响：用派姆单抗处理 PD-1 高表达的 T 淋巴细胞，24 小时后细胞凋亡率显著降低。同时，派姆单抗处理还能显著增加 TNF-α、IL-2、IFN-γ、穿孔素和颗粒酶 B 的分泌，说明 PD-1 抑制既能减少细胞凋亡，又能恢复 HIV 感染 T 细胞的免疫功能。
5. PD-1 抑制对 MAPK/NF-κB 信号通路的影响：用不同浓度派姆单抗处理 HIV 感染个体的原代 T 细胞 24 小时后，Western blot 分析显示，在 PD-1 过表达的 T 淋巴细胞中，派姆单抗处理显著下调 pMEK1/2、p-p38 MAPK 和 p-NF-κB p65 的表达，表明 PD-1 抑制调节了 MAPK/NF-κB 通路的激活状态。
6. PD-1 抑制对蛋白相互作用的影响：Co-IP 实验发现，在 PD-1 过表达的 T 淋巴细胞中，SHP-2 和 SHP-1 蛋白存在于输入组和免疫沉淀组。派姆单抗处理后，p-c-Raf（Ser338）的表达显著降低，说明 PD-1 通过与 SHP-2 相互作用促进 MAPK/NF-κB 通路激活，影响 HIV 感染 T 细胞的免疫逃逸机制。
7. HIV 感染对 PD-1 表达的调节：Western blot 分析显示，HIV 感染的 PD-1 低表达组 Nef 蛋白水平低于 PD-1 高表达组。Co-IP 实验证实 HIV-1 Nef 蛋白与 PD-1 存在相互作用，RT-qPCR 结果进一步支持这一发现，表明 Nef 蛋白通过与 PD-1 启动子区域相互作用，上调 PD-1 转录，增加 T 细胞上 PD-1 的表达。

研究结论和讨论部分指出，PD-1 在 HIV 感染中通过调节 MAPK/NF-κB 信号通路，抑制 T 细胞增殖和细胞因子分泌，导致免疫耗竭，使病毒持续存在。ART 虽能增加 CD4⁺和 CD8⁺ T 细胞数量，减少早期 T 细胞凋亡，但无法完全逆转 PD-1 相关的免疫抑制。PD-1 抑制不仅能减少 T 细胞凋亡，恢复免疫功能，还能激活潜伏 HIV-1 转录，为 HIV 治疗提供了新的潜在策略。未来研究应进一步明确 PD-1 的调节机制及其作为治疗靶点的潜力，尤其是与新型免疫检查点抑制剂联合使用，有望为 HIV 感染者提供更有效的治疗方案。这项研究为 HIV 治疗领域开辟了新的方向，让人们在对抗艾滋病的道路上看到了新的希望。