墨西哥青柠成熟叶片农杆菌介导瞬时基因表达体系的优化及其功能基因组学研究

为解决柑橘成熟叶片对农杆菌(Agrobacterium)介导遗传转化抗性的难题，研究人员开发了包含微创预处理、二硫苏糖醇(DTT 100 μM)和Silwet(0.02%)的优化体系，使5周龄墨西哥青柠(Citrus aurantifolia)离体与活体叶片的甜菜红素(betalain)积累分别提升3倍和5倍，qRT-PCR证实该体系显著增强瞬时基因过表达，为柑橘属功能基因组学研究提供新工具。

　　成熟柑橘叶片虽对病害更具抗性，但其对农杆菌(Agrobacterium)介导遗传转化的顽固性长期制约功能基因组学研究。针对墨西哥青柠(Citrus aurantifolia)成熟叶片，研究者系统优化了瞬时转化体系：采用携带RUBY报告基因（可将酪氨酸催化为鲜红色甜菜红素betalain）的农杆菌菌株，通过无针注射渗透法接种，评估菌株类型、密度、T-DNA转移诱导剂、表面活性剂、植物激素及微创预处理等多参数影响。实验显示，微创处理联合二硫苏糖醇(DTT 100 μM)和Silwet-77(0.02%)预处理使5周龄叶片转化效率显著提升，离体与活体叶片的甜菜红素积累量分别达对照3倍和5倍，qRT-PCR定量验证基因过表达水平。该研究首次实现柑橘成熟叶片的原位瞬时表达，为重要经济作物功能基因研究开辟新途径。