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为应对高致病性禽流感 H5N1 病毒潜在大流行风险，香港大学研究人员开展了鼻内流感病毒载体疫苗（DelNS1 LAIV）研究。结果显示，该疫苗能诱导小鼠和仓鼠产生有效免疫反应，提供对 H5N1 病毒的保护，为防控 H5N1 病毒感染提供了新策略。
流感病毒，这个令人闻风丧胆的 “小恶魔”，时不时就会兴风作浪，给人类健康带来巨大威胁。其中，高致病性禽流感 H5N1 病毒自 1997 年起就开始在水禽中肆虐，不仅在家禽间引发大规模疫情，还时不时 “跨界” 感染人类。近年来，H5N1 病毒的 2.3.4.4b 分支更是 “不安分”，不仅感染了牛，还出现了一些变异，让人们担心它会更容易感染人类，引发全球性的大流行。由于 H5N1 病毒在野生鸟类中持续存在，想要彻底消灭它几乎是不可能的任务。所以，研发有效的疫苗来预防潜在的 H5N1 病毒大流行，就成了全球科学家们争分夺秒要攻克的难题。
在这场与病毒的赛跑中，香港大学的研究人员挺身而出。他们利用之前开发 COVID-19 疫苗时使用的删除 NS1 基因的减毒活流感病毒载体系统（DelNS1 LAIV），基于公开的基因序列，迅速开发出了针对牛 H5N1 及相关 2.3.4.4b 分支毒株的鼻内疫苗。这项研究成果发表在《Nature Communications》上，为我们抗击 H5N1 病毒带来了新的希望。
研究人员在开展这项研究时，运用了多种关键技术方法。在细胞和病毒培养方面，使用了从 ATCC 获取的 MDCK、A549 和 293T 细胞系，通过反向遗传学技术拯救出多种流感病毒毒株 。为检测疫苗效果，进行了动物实验，选用 6 - 8 周龄的雌性 BALB/c 小鼠和雄性金黄地鼠，分别进行免疫和病毒攻毒实验 。同时，采用了多种检测技术，如通过微量中和（MN）试验检测血清中和抗体效价，利用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测抗体水平，借助细胞内细胞因子染色（ICS）和 NP147四聚体染色分析 T 细胞反应等。
下面来详细看看研究结果：
- DelNS1 减毒活病毒载体 H5N1 疫苗具有高度免疫原性：研究人员合成了 H5 和 N1 基因，并构建了 DelNS1-cH5N1 和 DelNS1-mH5N1 两种减毒活疫苗。这两种疫苗在 MDCK 细胞和鸡胚中都能良好复制，且基因组稳定性高。在小鼠和仓鼠实验中，疫苗无毒性，接种后不会在动物体内造成病毒传播。免疫原性实验表明，单剂量的 DelNS1-H5N1 LAIV 疫苗能在小鼠和仓鼠体内诱导产生抗 H5 抗体、中和抗体、黏膜 IgA 以及 T 细胞反应，且鼻内免疫途径能诱导更强的肺部 CD8+ T 细胞反应。
- DelNS1-H5N1 疫苗能有效抵御 H5N1 病毒的致命攻击：研究人员构建了貂和牛 H5N1 病毒的反向遗传版本用于动物攻毒实验。结果显示，未接种疫苗的小鼠在感染病毒后一周内死亡，而接种疫苗的小鼠在两周观察期内无明显疾病症状，且在其组织中未检测到病毒。在仓鼠实验中，单剂量接种疫苗的仓鼠能得到有效保护，两剂量接种可实现最佳保护。同时，该疫苗还能诱导呼吸道组织的黏膜免疫，防止病毒在气道复制，并且对同分支的不同病毒株具有交叉保护作用。
- 存在预先免疫时 DelNS1-H5N1 LAIV 免疫效果不受影响：由于疫苗通过鼻内接种，研究人员担心之前感染其他流感病毒（如季节性流感）会影响疫苗的免疫效果。实验表明，预先感染 H3N2 和 H1N1 DelNS1 LAIVs 的小鼠，后续接种 DelNS1-H5N1 LAIV 时，其抗 H5N1 免疫反应不受影响，仍能有效抵御致命剂量的貂 H5N1 病毒攻击。而且，单剂量接种 DelNS1-H5N1 LAIV 疫苗能诱导持久的免疫记忆，接种 8 周后的小鼠仍具有显著水平的抗 H5N1 病毒中和抗体和 BAL IgA，且能抵御 H5N1 病毒的致命攻击。较低剂量的疫苗也能诱导可比的抗体水平并提供有效保护。
综合上述研究，DelNS1-H5N1 LAIV 疫苗展现出了良好的免疫原性和保护效果。它不仅能在小鼠和仓鼠体内诱导产生全面的免疫反应，有效抵御 H5N1 病毒的感染，而且不受预先存在的季节性流感病毒免疫的影响，单剂量接种就能提供持久的免疫保护。这一研究成果为未来应对 H5N1 病毒大流行提供了一种极具潜力的疫苗选择。同时，DelNS1 流感病毒载体系统因其安全性、易于生产以及能有效诱导全身和黏膜免疫的特点，在未来应对其他新兴流感病毒时也可能发挥重要作用。不过，目前该疫苗还需要进一步在人体中进行评估和验证，以确定其在人类中的安全性和有效性，为人类健康筑起更坚实的防线。
