抑制 EED 介导的组蛋白甲基化：缓解神经炎症的新策略

《Journal of Neuroinflammation》：Inhibition of EED-mediated histone methylation alleviates neuroinflammation by suppressing WNT-mediated dendritic cell migration

为探究靶向 H3K27me3治疗神经炎症的效果，浙江大学研究人员开展了关于 EED 抑制剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）影响的研究。结果显示，EED 抑制剂可抑制树突状细胞（DC）迁移、缓解炎症，为自身免疫性疾病治疗提供新方向。相关成果发表在《Journal of Neuroinflammation》上。

　　

在人体的免疫系统中，树突状细胞（Dendritic Cells，DC）就像一群 “侦察兵”，负责捕捉抗原并传递给 T 细胞，从而启动免疫反应。然而，在自身免疫性疾病，如多发性硬化（Multiple Sclerosis，MS）中，DC 的过度活跃会导致免疫系统误判，攻击中枢神经系统（Central Nervous System，CNS），引发神经炎症。目前，针对这类疾病的治疗手段有限，许多研究集中在癌症领域，对于靶向 DC 治疗神经炎症的探索还处于初期阶段。为了寻找新的治疗策略，浙江大学的研究人员开展了一项重要研究，相关成果发表在《Journal of Neuroinflammation》上。

研究人员为了深入了解 EED 在神经炎症中的作用，采用了多种关键技术方法。在动物实验方面，构建了 EAE 小鼠模型（一种常用的模拟 MS 的小鼠模型），通过给小鼠注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein，MOG_{35 - 55}）肽和百日咳毒素诱导疾病发生。在细胞实验中，培养了小鼠树突状细胞系 DC2.4、小鼠骨髓来源的树突状细胞（Bone Marrow - Derived Dendritic Cells，BMDCs）以及人单核细胞来源的树突状细胞（Monocyte - Derived Dendritic Cells，moDCs）。同时，运用了转录组分析技术，全面检测细胞基因表达的变化；利用染色质免疫沉淀测序（Chromatin Immunoprecipitation Sequencing，ChIP - seq），研究组蛋白修饰与基因调控的关系；还借助蛋白质免疫印迹（Western blotting）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative Real - Time Polymerase Chain Reaction，qRT - PCR）等技术，从分子水平探究相关蛋白和基因的表达情况 。

研究结果如下：

1. EED 抑制剂减轻 EAE 症状：给 EAE 小鼠模型使用 EED 抑制剂 EED226 后，小鼠对 EAE 的敏感性显著降低，疾病症状明显减轻。组织学染色显示，EED226 处理后，小鼠脊髓脱髓鞘区域的炎症浸润受到强烈抑制，髓鞘得到更好的保护。通过流式细胞术分析发现，EED226 处理后，幼稚 T 细胞（CD4⁺CD62L^hiCD44^lo）数量增加，而中枢记忆 T 细胞（CD4⁺CD62L^loCD44^hi）以及促炎的 Th1（CD4⁺IFN - γ⁺）和 Th17（CD4⁺IL - 17⁺）细胞亚群的分化受到抑制。同时，脾脏中迁移性 CD11c⁺ DC 的比例以及成熟 DC（CD11c⁺CD80⁺或 CD11c⁺MHC - II⁺）的比例显著降低，这表明 EED 抑制剂抑制了免疫激活，从而减轻了 EAE 的发展。

2. EED 抑制剂抑制 DC 迁移：研究人员用多种 EED 抑制剂处理 DC2.4 细胞，发现这些抑制剂在不影响细胞活力的情况下，能有效降低 H₃K27me₃水平，并显著抑制 DC 的迁移。体外 Transwell 实验和免疫荧光实验表明，EED 抑制剂限制了 DC 伪足的形成，从而阻碍其迁移。而且，过表达 EED 能部分逆转这些抑制剂对 H₃K27me₃表达和 DC 迁移的抑制作用，说明 EED 抑制剂的功能至少部分通过 EED 介导。

3. EED 抑制剂调节 DC 迁移相关转录程序：对用 EEDi - 5285 处理的 DC2.4 细胞进行转录组分析，发现 EEDi - 5285 处理组与对照组的转录组存在明显差异。基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis，GSEA）显示，EEDi - 5285 处理组中下调的基因主要富集在炎症反应、微管细胞骨架组织等相关基因特征中，而上调的基因则与 WNT 信号通路等相关。与 DC 迁移相关的基因，如 Ccl9、Ccr7 等，在 EEDi - 5285 处理组中表达水平降低，进一步证实了 EED 抑制剂对 DC 迁移的抑制作用。

4. EED 抑制剂通过 WNT 信号通路抑制 DC 迁移：GSEA 发现，EEDi - 5285 处理组中上调的基因富集在 H₃K27me₃靶点、EED 靶点和 PRC2 靶点相关的基因特征中。分析发现，EED 抑制剂处理后，经典 H₃K27me₃靶基因，如 Wnt7b 等表达升高，且差异表达基因中与 WNT 通路相关的基因占比显著。qRT - PCR 结果也证实，EED 抑制剂能诱导 WNT/β - catenin 响应基因的表达。当使用 WNT 信号通路抑制剂 Wnt - C59 处理时，EED 抑制剂对 DC 迁移的抑制作用消失，表明 WNT 信号通路的激活是 EED 抑制剂调节 DC 迁移的关键机制。

5. Eed 基因缺失抑制 DC 迁移并减轻 EAE 发展：通过基因编辑技术，构建了 DC 中 Eed 基因条件性敲除（Eed cKO）小鼠。研究发现，Eed 基因缺失显著抑制了 DC 对 CCL19 和 CCL21 趋化因子的迁移反应，且 EED 抑制剂对 Eed cKO 小鼠的 DC 迁移没有进一步抑制作用，说明 EED 抑制剂的作用依赖于 EED。在 EAE 模型中，Eed cKO 小鼠的 EAE 症状更轻，中枢神经系统的炎症浸润减少，促炎细胞因子表达降低，抗炎细胞因子表达增加，这表明 Eed 基因缺失能有效减轻 EAE 的发展。

6. EED 抑制剂抑制人 DC 迁移：在人 moDCs 实验中，EED 抑制剂同样能抑制 H₃K27me₃水平，增强 WNT/β - catenin 响应基因的表达，并显著抑制成熟 moDC 对 CCL19 和 CCL21 的趋化反应，这表明 EED 抑制剂在人类 DC 迁移中也具有抑制作用，提示 EED 可能是人类自身免疫性疾病治疗的潜在靶点。

研究结论和讨论部分指出，该研究首次揭示了 EED 在调节 DC 迁移和预防 EAE 中的新作用，发现 EED 抑制剂可通过激活 WNT 信号通路抑制 DC 迁移，从而减轻神经炎症。这为自身免疫性疾病的治疗提供了新的策略和潜在的治疗靶点。然而，目前仍有一些问题有待进一步研究，例如 EED 在其他免疫细胞中的作用，以及不同 EED 抑制剂在体内的有效性和免疫调节差异等。尽管如此，这项研究为基于 DC 的自身免疫性疾病治疗开辟了新的方向，有望推动相关领域的临床发展。