分子特征分析在低JAK2V617F变异等位基因分数MPN患者诊断中的贡献：一项真实世界队列研究

编辑推荐：本研究针对低JAK2V617F VAF（<4%）的MPN患者诊断难题，通过HRM和NGS技术对54例患者进行分子特征分析，发现46.3%病例存在JAK2/CALR/MPL额外驱动突变，67.7%携带TP53等继发突变，证实BMB阴性不能排除MPN诊断，为低VAF病例的精准诊疗提供了分子层面的决策依据。

　　

在血液肿瘤领域，骨髓增殖性肿瘤（MPN）的诊断长期依赖JAK2^V617F突变检测，但临床实践中低变异等位基因分数（VAF<4%）病例的诊断始终存在争议。这类患者既可能代表早期MPN，也可能是年龄相关的克隆性造血（CHIP），现有WHO标准对这类"灰色地带"病例缺乏明确指导。更复杂的是，骨髓活检（BMB）作为金标准常因患者耐受性差而难以实施，导致诊断陷入分子与形态学证据矛盾的困境。

法国克莱蒙费朗大学医院的研究团队通过回顾性分析2007-2019年间3,911例检测队列，筛选出54例低JAK2^V617F VAF的MPN患者（PV 15例，ET 39例），采用高分辨率熔解曲线（HRM）筛查JAK2 exon12/CALR/MPL驱动突变，对阴性病例进一步开展98基因panel的二代测序（NGS）。研究创新性地整合VAF量化、多基因突变谱与BMB结果，相关成果发表于《Annals of Hematology》。

关键技术包括：1）采用MutaQuant Kit定量JAK2^V617F VAF（灵敏度0.014%）；2）HRM技术筛查CALR exon9/MPL exon10突变；3）SOPHiA Genetics的98基因NGS panel（测序深度>1000X）；4）对法国单中心真实世界队列进行多学科诊断复核。

研究结果揭示：

1. 分子特征方面：46.3%（25/54）患者存在额外驱动突变，ET组CALR突变率达33.3%。NGS在67.7%（21/31）初始阴性病例中检出突变，包括TP53（9.7%）、TET2（25.8%）等，发现1例HRM漏诊的CALR低VAF（3.7%）和1例JAK2双突变（Leu611Ser+V617F）。

2. VAF特征规律：携带额外驱动突变组JAK2^V617F VAF中位数仅0.09%，显著低于无突变组（2.1%，p<0.01），提示极低VAF可能预示共存驱动突变。

3. BMB诊断效能：阳性BMB组55%存在驱动突变，但40%阴性BMB病例经分子检测确诊MPN。值得注意的是，1例BMB阴性ET患者通过NGS检出CALR突变实现确诊。

4. 临床诊断验证：多突变负荷组（≥2突变）100%符合MPN诊断，而单突变组可能与CHIP重叠。JAK2^V617F VAF>2%的无突变患者仍需考虑MPN可能。

结论部分强调三方面突破：首先确立低JAK2^V617F VAF（尤其<1%）与共存驱动突变的强关联性；其次证实分子检测可弥补BMB局限性，阴性活检不能排除MPN；最后提出整合VAF阈值、突变谱和临床特征的诊断框架。研究同时发现3例（CHEK2/DDX41/GATA2）可能影响发病的胚系突变，为遗传易感性研究提供线索。

该研究对临床实践具有重要指导价值：对于JAK2^V617F VAF<2%且BMB阴性病例，建议扩展CALR/MPL检测；当发现TP53等继发突变时，需警惕疾病进展风险；而高龄患者需谨慎鉴别CHIP。这些发现为修订MPN诊断标准提供了真实世界证据，凸显多组学整合在血液肿瘤精准诊断中的必要性。